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如缺硒元素或者维生素类的长期缺乏也可诱发人体发生癌变。(2)机体(宿主)内部致病因子:遗传基因的缺陷，容易发生P53基因突变，可能使得造血器官，乳腺，胧，肝，脑，膀，肺和结肠发生常见癌变。精神刺激，在英国的一个报告会上面有报告称，二百多例恶性肿瘤患者中患癌前直接受过严重精神刺激的就有65%左右。 2.2.1 肿瘤
肿瘤是一种极不正常的肿块或组织,生长速度快,与正常组织不协调,受到刺激还会继续生长。肿瘤分为良性和恶性,良性肿瘤不是致命的。恶性肿瘤即癌,癌的发生和发展分致癌的启动(initiationofeareinogesis),促癌(promotion)和癌的形成和发展(development)三个阶段。它首先局部浸润周围组织,还能通过血液和淋巴系统转移到其他组织\侵袭!转移行为是恶性肿瘤的本质特征。癌侵袭(invasion)是指癌细胞脱离原发生长部位,突破基底膜和细胞外基质构成的屏障,侵袭毗邻的组织。首先癌细胞通过膜表面的受体与基底膜、基质成分如层粘连蛋白(laminin)、纤维粘连蛋白(fibroneetin)和胶原蛋白(eollagen)等结合,然后癌细胞分泌或诱导间质细胞分泌多种蛋白酶降解基底膜和基质,最后定向运动穿越破损的基底膜的基质部位\转移(metastasis)即癌细胞借助血管、可分为:a.原发瘤增殖,肿瘤新血管生成;b.肿瘤细胞侵袭毗邻的基底膜!基质和正常细胞;c.癌细胞穿入血管或淋巴管并在循环系统中存活;d.癌细胞栓塞、滞留于远隔靶器官的微血管中并增殖;e.癌细胞穿出血管或淋巴细胞,在靶器官内形成微转移灶;f.肿瘤间质内新血管生成,转移瘤快速生长。
2.2.2 瘤细胞从原发瘤体脱落
肿瘤形成以后，通过所在器官的弥散获得最初的生长营养，细胞逐渐分化、增生。当瘤体直径达到2mm以上，增殖生长要靠足够的血液供应。研究证明肿瘤细胞及间质细胞释放促血管生成的因子如血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial cell growth factor ,VEGF）,血管形成素（angiogenin），成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF),白细胞介素-8（interleukin-8），血小板来源的内皮细胞生长因子（platelet-derived endothelial cell growth factor, PD-ECGF）等。这些因子使内皮细胞迁移、增殖形成管腔结构，最终在瘤体内部形成微血管网。
已有结果证明瘤细胞之间相互黏着的能力较正常细胞为低，透射电镜显示多种肿瘤细胞的桥粒、半桥粒和间隙连接数量减少。细胞内的钙含量也减少，这些都是
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构成粘附力降低的原因之一。另外还有报告瘤细胞表面电荷密度增加，相互排斥力加大，尤其是转移率高的细胞电泳率增高，这使得瘤细胞从瘤体脱落的可能性增加。 还有细胞表面的某些粘附分子缺失令细胞间连接遭受破坏，也有脱落的危险。 2.2.3 瘤细胞侵袭周围组织
肿瘤扩散发生最初是侵袭，而侵袭发生之后就会导致一个结果，就是扩散。瘤细胞在侵袭的过程中间，是先从母体细胞中脱落分离，然后在向临近组织侵袭，不过有研究表明这两种运动也可同时进行。在十九世纪鲁道夫·路德维希·卡尔·菲尔绍就提出了突变之后的癌细胞具有类似于阿米巴虫伸出借以向各方向运动的伪足，故移动迁移速度比非恶性肿瘤细胞快。目前已有多位学者提出，在肿瘤细胞可以利用伪足运动来完成侵袭周围组织的这一过程。这个过程当中，肿瘤细胞的表面将分泌多种物质因子，使得癌细胞改变相应的骨架，从而完成固定向其他组织器官侵袭扩散的运动。【5】
2.3天然抗肿瘤活性物质研究现状
2.3.1 广泛的天然抗肿瘤活性研究
目前,化疗药物广泛应用在大部分的抗肿瘤前线,具有很大的副作用和细胞毒性,而且耐药性就是由于这些化疗药物在与恶性肿瘤细胞长期接触后而产生的;上述问题几乎不会发生在天然抗癌提取物当中,天然产物不仅对身体的负面影响远远小于以往抗肿瘤药物,副作用伤害小的抗肿瘤新药的发展也有非常广阔的前途。所以,开发绿色的抗肿瘤活性物质也逐渐被提上了日程。[5]
如今已天然抗肿瘤活性物质被筛选得到也比较多,许许多多的抗肿瘤的作用原理也都差不多。比如说，紫杉醇（自中华紫杉分离的）能够对微管蛋白作用,最终使得细胞破裂凋亡。从Green tea中提取出的有效成分聚酷型儿茶素,能诱导HL-60细胞向稳定成熟细胞分化；人参皂苷Rg3是存在于中药人参中的四环三帖皂苷,其分子式为C42H72013,它可通过对肿瘤细胞新生血管形成的阻断,诱导细胞调亡，从而达到抗癌疗效；再如，灵芝和灵芝的有效成分可增强免疫系统的巨噬细胞的吞噬功能,促进T淋巴细胞增殖,增强免疫T细胞的细胞毒副作用；斛皮素(quercetin)是一种黄酮类物质，广泛存在的生物体内,是自由基的捕获剂和抗氧剂,减轻氧自由基对细胞的损害可能是其抗癌和防癌的机制；金爱康片剂,是一种天然钙拮抗剂，它是由汉防己甲素制成，而汉防己甲素是汉防己的根部分离出来的有效成分。研究显示表明单独使用化疗药物治疗恶性淋巴癌等急慢恶性肿瘤的缓解作用比它与化疗
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药物合用效果差很多。[6]
2.3.2 藻类抗肿瘤活性物质的研究
藻类植物含有许多抗肿瘤的活性物质，其中所含多糖是其有效成分，藻类多糖可以直接的或间接的抑制癌细胞增殖和侵袭。1，可通过对淋巴细胞的刺激并使其增殖；对巨噬细胞活性的提高；或者增强吞噬指数的方式，提高机体免疫细胞抑制癌细胞的能力。2，可通过增强红细胞膜的流动性，抑制癌细胞通过血液途径侵袭或转移，并抑制癌细胞增殖。
通过对曲显俊等螺旋藻多糖体内和体外抗肿瘤研究分析发现，钝顶螺旋藻多糖对白血病细胞有46.0%抑瘤率，对乳腺癌细胞有68%的抑瘤率。当螺旋藻多糖浓度达到300mg/kg时通过灌胃给药的方式对小鼠进行灌胃。结果发现，此浓度的螺旋藻多糖对小鼠肉瘤有55.2%的抑瘤率。在体外抗肿瘤实验过程中，周岩冰等研究发现，螺旋藻多糖能够抑制体外培养的直肠癌细胞、结肠癌细胞及胃癌细胞,而且一定范围内的抑制率和浓度呈线性关系,螺旋藻多糖在20mg/l剂量下时,对结肠及直肠癌细胞抑制率为42.04%。[10]
对羊栖菜中提取的羊栖菜多糖研究发现，其可以对特定的肿瘤血管内皮细胞的增殖起到抑制作用，而这种特定肿瘤被证实是人体体外培养的肺癌细胞所诱导的。
海带根中的一种抗乳腺癌物质，对其研究表明其为一种氨基酸。长叶海带能够明显延长同种同系淋巴细胞白血病的小鼠的生命延长率。[11]
2.4 划痕实验
细胞划痕实验是指将细胞培养到相互融合后再用无菌枪头在孔板中央区域画一条直线,导致这条直线内的细胞被物理机械力去除掉,用无菌PBS液洗干净,在培养液中继续进行培养,并观察细胞向划痕区域侵袭迁移的情况。通过细胞向划痕移动并使划痕宽度缩减的程度确定细胞的迁移运动能力。细胞划痕实验的优点是,实验成本低,而且是一种简单易操作地检测细胞运动能力的基本方法，常用于评价肿瘤细胞的侵袭转移能力。
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3 研究方法
3.1 材料与仪器
3.1.1 材料 试剂：蒸馏水；
无水乙醇（分析纯）； 浓硫酸（分析纯）； 氯仿（分析纯）； 葡萄糖（分析纯）； 正丁醇（分析纯）； 蒽酮（分析纯）；
药材：干地木耳（青海海东地区野生地木耳）； 3.1.2 仪器
紫外分光光度计（上海分析仪器厂，型号721）；
多功电子恒温水浴锅（上海凯乐电紫设备厂，型号SYG系列）； 电子分析天平（上海明桥精密仪器有限公司，型号FA1004N）； 低速台式离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司，型号:FYL-YS-30L ）。 旋转蒸发器（型号为RE—2000A，巩义市予华仪器有限公司）； 双人净化工作台（型号为HJ—CJ—2D,）；
3.2 地木耳多糖的提取
3.2.1 绘制标准曲线 (1）标准曲线的制作：
2g/L蒽酮试剂:溶解2g蒽酮于浓H2SO4（A.R.95.5%），现配现用。0.1g/L葡萄糖溶液：准确称取标准葡萄糖0.01g，用少量蒸馏水溶解后定容至100mL容量瓶中。
分别取0.1g/L的葡萄糖溶液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，然后向其中加入双蒸水配制至1.00mL；分别加入4.00mL蒽酮试剂，放置在冰水浴中迅速冷却，然后再沸水浴，直至在沸水浴中煮沸，管口应该密封完好，以防试剂挥发。煮沸持续10分钟，然后将其取出，快速冷却至室温，放置大约10min，在可见光分光光度计620nm处进行比色比色。空白项是以相同方法处理的蒸馏水，然
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后比色。在标准曲线上找到光密度值所对应的糖浓度。以糖的含量（μg）为横坐标，OD值为纵坐标，自作出标准曲线。 3.2.2 地木耳的提取
准确称取地木耳粉末20.00g放入1000ml的原地烧瓶中，加入700ml的蒸馏水。连接好冷凝装置。将装置放入90℃的水浴锅中固定，连续提取3个小时，将提取液过滤，滤渣放入瓶中继续提取2个小时，滤出滤液。合并上清液，减压过滤后再利用旋转蒸发仪将上清液浓缩至20ml。加入60ml的无水乙醇，搅匀，静置在4℃低温冰箱过夜。
3.2.3 Sevage试剂除蛋白纯化及浓缩
取出地木耳多糖溶液，放入2000G，10℃高速离心机中离心15分钟，收集沉淀物。取地木耳多糖沉淀物加入4mLSavege试剂在振荡器中震荡20min，静置，取上清液，弃去下层溶液。再加入4mLSavege试剂，相同操作连续5次。除蛋白后放入减压干燥箱40℃烘干成粉，密封保存。 3.2.4 地木耳多糖提取率及其含量的测定
（1）地木耳多糖的测定：
将地木耳多糖稀释，取出1mL加入4mL蒽酮试剂，放置在冰水浴中迅速冷却，然后再沸水浴，直至在沸水浴中煮沸，管口应该密封完好，以防试剂挥发。煮沸持续10分钟，然后将其取出，快速冷却至室温，放置大约10min，在可见光分光光度计620nm处进行比色比色。空白项是以相同方法处理的蒸馏水，然后比色。在标准曲线上找到光密度值所对应的糖浓度。
（2）提取率及纯度测定：提取率的计算：用测得的多糖质量除以20.00克，即为多糖的提取率。
3.3 多糖溶液的配制
取出去除蛋白后的地木耳多糖干燥粉末0.4035g，加入2.36ml蒸馏水，和2.60ml的pbs缓冲液以及双抗，溶解成溶液。分别配制成10μg/ml,20μg/ml和40μg/ml三种浓度的地木耳多糖溶液，放置在37℃的恒温培养箱。
3.4 HeLa细胞分板培养及划痕实验
3.4.1 试剂及设备
胰蛋白酶，青霉素和链霉素，二甲亚砜（DMSO）（sigma，USA），DMEM，胰酶