分子实验常用试剂、缓冲液配制(2)

2019-05-18 17:09

0.4%(V/V) Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin 配制量 1L 配置方法

1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL。溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去离子水中,搅拌溶解后,加去离子水定容至100mL,高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 12g Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至1L后,高温高压灭菌。

5. 待溶液冷却至60℃以下时,加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mL Ampicillin(100mg/mL)。 6. 均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基 组份浓度 2%(W/V) Tryptone

0.5%(W/V) Yeast Extract 0.05%(W /V) NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 配制量 1L 配置方法

1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去离子水中溶解1.86g KCl后,定容至100mL。

2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去离子水中溶解19g MgCl2后,定容至100mL,高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 20g Yeast Extract 5g NaCl 0.5g 4. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 5 量取10mL 250 mM KCl溶液,加入到烧杯中。 6. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1L。 8. 高温高压灭菌后,4℃保存。

9. 使用前加入5mL灭菌的2M MgCl2溶液。

9、SOC培养基 组份浓度 2%(W/V) Tryptone

0.5%(W/V) Yeast Extract 0.05%(W /V) NaCl 2.5mM KCl 10mM MgCl2 20mM 葡萄糖 配制量 100mL 配置方法

1. 配制1M葡萄糖溶液。将18g葡萄糖溶于90mL去离子水中,充分溶解后定容至100mL,用0.22μm滤膜过

滤除菌。

2. 向100mL SOB培养基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL,均匀混合。 3. 4℃保存。

10、2×YT培养基 组份浓度 1.6%(W/V)Tryptone, 1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)NaCl 配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 16g Yeast Extract 10g NaCl 5g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后,4℃保存。

11、Φb×broth培养基 组份浓度 2%(W/V)Tryptone, 0.5%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)MgSO4?7H2O

配制量 1L 配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 20g Yeast Extract 5g MgSO4?7H2O 5g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 滴加1N KOH,调节pH值至7.5。

4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后,4℃保存。

12、NZCYM培养基 组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract

0.1%(W/V) Casamino Acid 1%(W /V) NZ胺 0.5%(W /V) NaCl

0.2%(W /V) MgSO4?7H2O 配制量 1L

配置方法 1.称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Yeast Extract 5g Casamino Acid 1g NZ胺 10g NaCl 5g MgSO4?7H2O 2g 2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压后,4℃保存。

13、NZYM培养基 组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract

1%(W /V) NZ胺 0.5%(W /V) NaCl

0.2%(W /V) MgSO4?7H2O

配置方法 NZYM培养基除不含Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外,其他成份与NZCYM培养基相同。 14、NZM培养基 组份浓度 1%(W /V) NZ胺

0.5%(W /V) NaCl

0.2%(W /V) MgSO4?7H2O 配置方法 NZM培养基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。 15、一般固体培养基的 配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。

配制 Agar(琼脂:铺制平板用) 15g/L Agar(琼脂:配制顶层琼脂用) 7g/L Agarose(琼脂糖:铺制平板用) 15 g/L Agarose(琼脂糖:配制顶层琼脂用) 7g/L

2. 高温高压灭菌后,带上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高,小心烫伤)。

3. 待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素),摇动容器充分混匀。 4. .铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养皿)。

16、LB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度 1%(W /V) Tryptone 平板培养基 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1mg/mL Ampicillin 0.5%(W /V) IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5%(W /V) Agar 配制量 1L 配置方法 1. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 10g

Yeast Extract 5g NaCl 10g

2. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH溶液(约0.2mL),调节pH值至7.0。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。

6. 加入1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。

7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。 8. 4℃保存平板。 17、TB/Amp/X-Gal/IPTG 组份浓度 1.2%(W /V) Tryptone

平板培养基 2.4%(W/V) Yeast Extract 0.4%(W/V) Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPO4 0.1mg/mL Ampicillin

0.024mg/mL IPTG 0.04mg/mL X-Gal 1.5%(W /V) Agar 配制量 1L

配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液(0.17M KH2PO4,0.72M K2HPO4)100mL。 2. 称取下列试剂,置于1L烧杯中。

Tryptone 12g

Yeast Extract 24g Glycerol 4mL 3. 加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解。 4. 加水离子水将培养基定容至1L后,加入15gAgar。 5. 高温高压灭菌后,冷却至60℃左右。

6. 加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin(100mg/mL)、1mL IPTG(24mg/mL)、2mL X-Gal(20mg/mL)后均匀混合。

7. 铺制平板(30~35mL培养基/90mm培养基)。 8. 4℃保存平板。 生物化学实验常用试剂的配制方法

1、0.5mol/L氢氧化钠溶液 组份浓度 0.5mol/L

配制量 2L 配置方法 1.准确称取氢氧化钠40g。

2.用去离子水溶解并稀释至2L。 2、0.5mol/L盐酸溶液 组份浓度 0.5mol/L

配制量 2L 配置方法 1.准确量取盐酸83.4mL。 2.用去离子水稀释至2L。 4、0.2%葡萄糖标准溶液 组份浓度 0.2%

配制量 1L 配置方法 1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中,在70℃干燥2小时。 2.干燥器中冷却至室温,重复干燥,冷却至恒重。 3.准确称取葡萄糖2.000g。 4.用去离子水溶解并定容至1L 5.于4℃保存。

5、250μg/mL牛血清 组份浓度 250μg/mL 白蛋白标准液 配制量 2L 配置方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。

2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。 3.4℃保存。 6、Folin试剂甲

配置方法 1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中,

加入50g无水碳酸钠,溶解,待用。 2.称取0.5g酒石酸钾钠,溶于80mL去离子水中, 加入0.25g硫酸铜?5水,溶解。 3.将1:2:去离子水按20:4:1的比例混合即可。

4. 4℃保存,可用一周。 7、Folin试剂乙 配置方法

1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g,

钼酸钠?2水6.2526g,去离子水175mL,85%磷酸12.5mL, 浓盐酸25mL,充分混合。

2.回流10小时,再加硫酸锂37.5g,去离子水12.5mL及数滴溴。 3.然后开口沸腾15min,以驱除过量的溴,冷却后定容到250mL。 4.于棕色瓶中保存,可使用多年

注意:上述制备地Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左 右,几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液,我们这时是把贮备液于使用前稀释18 倍,使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备 液浓度的标定,一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液,当溶液颜色由红变为紫灰,再突然变成墨绿即为终点,如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙,终点不太好掌握,溶液地颜色是由浅黄变为浅绿,再变为灰紫色为终点。 8、DNS试剂

配置方法 1.取3,5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。 (3,5-二硝基水杨酸试剂)

2.将3,5-二硝基水杨酸溶解,然后加入酒石酸钾钠300g。 3. 待其完全溶解,用去离子水稀释至2000mL,棕色瓶保存。 9、5%蔗糖溶液 组份浓度 5%

配制量 1L 配置方法 称取蔗糖50g,用去离子水溶解定容至1L。 10、0.1mol/L蔗糖溶液 组份浓度 0.1mol/L

配制量 1L

配置方法 称取蔗糖34.230g,用去离子水溶解并定容至1L。

11、20%乙酸溶液 组份浓度 20%

配制量 1.2L 配置方法 量取冰乙酸300mL,用去离子水稀释至1200mL。 12、30%(W/V)Acrylamide

组份浓度 30%(W/V)Acrylamide 0.05% 配制量 1L

配置方法 1.称量下列试剂,置于1L烧杯中

Acrylamide 290g

BIS 10g 2.向烧杯中加入约600mL的去离子水,充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至1L,用0.45μm滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中4℃保存。

注意:丙稀铣胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收, 其作用有积累性,配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。 13、40%(W/V)Acrylamide

组份浓度 40%(W/V)Acrylamide 0.05% 配制量 1L


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