Loading Buffer％（W/V） 10 SDS
0.5％（W/V） BPB 50％（V/V） 甘油 5％（W/V） β-巯基乙醇 配制量 5mL 配置方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。
1M 1.25mL
SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。 5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右 生物化学实验常用柱料数据及性质 1、DEAE阴离子交换纤维素 （1）纤维素的处理
取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀，过夜。次日再搅匀，静止30min留下沉集部分（重复3次），用真空泵抽干。然后用适量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的0.5mol/L的盐酸溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用0.5mol/L的氢氧化钠溶液浸泡30min，抽干，蒸馏水洗至中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸缓冲液浸泡待用。 （2）纤维素的重生
回收的纤维素先用0.5mol/L氯化钠-0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡，再按上述（1）操作处理，即可再次投入使用。 （3）纤维素的保存
回收后，用0.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡30min后，蒸馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中60℃烘干后，保存。
2、SephadexG型葡聚糖凝胶 （1）凝胶的特性要点
葡聚糖G后面的数字代表不同的交联度，数值越大交联度越小，吸水量越大。其数值大致为吸水量X的10倍。Sephadex对碱和弱酸稳定（在0.1mol/L盐酸中可以浸泡1～2小时）。在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好，但流速也越慢。交联葡聚糖工作时的pH稳定在2～11的范围内。葡聚糖G型凝胶分离的分子量分级范围为700～8×105。SephadexG型葡聚糖凝胶的数据见下表。
*本表数值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。 **为2.6×30cm层析柱在25℃用蒸馏水测定之值。 D＝Darcy’s law (2)凝胶的溶胀*
G系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到100℃，以缩短其溶胀时间。见下表 Sephadex G型葡聚糖凝胶溶胀所需时间
凝胶型号 G-10～G-200
20～22℃（室温）
所需最小溶胀时间*
100℃（沸水浴）
Tris-HCl
Sephadex G-10 G-15 G-25 G-50 G-75 G-100 G-150 G-200
3 3 3 3 24 72 72 72
1 1 1 1 3 5 5 5
*溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中。在整个溶胀过程中应避免剧烈地搅拌，尤其不能使用电磁搅拌，以免破坏了它的颗粒结构，以及产生许多碎末而影响洗脱时的流速。 （3）凝胶的回收与保存
凝胶的再生最好不要在柱上进行（有些凝胶可以在位清洗），可将凝胶在0.5mol/L氯化钠及0.5mol/L氢氧化钠的混合溶液中浸泡；一般约需30分钟以上。然后用蒸馏水洗至中性，最后用缓冲液平衡即可恢复使用。
经常使用的凝胶，一般加入一些抗菌剂放在普通冰箱中，即可保存较长的时间。如确切在相当长的时间里不准备使用时，则以保存干凝胶为好。处理时可先用较浓的氯化钠浸泡（如0.5mol/L）,在用0.5mol/L的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性，然后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理。一般可从30％的乙醇开始；每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间。在无水乙醇处理后，最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发。处理后的凝胶宜在80℃以下的温度烘干。在进行凝胶的回收时，如在每一步操作时，均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程。 【注意】
a．凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长。
b．不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇，以免凝胶颗粒收缩太快，破坏了它地结构，因而影响了它地分离能力。
c．在乙醚未充分挥发完以前，切不可将含有多量乙醚地凝胶放入烘箱，以免发生危险。 d．溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结，以免其球形结构被破坏。 微生物学实验常用培养基的配制 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂 pH
水 121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉 硝酸钾 氯化钠 磷酸氢二钾 硫酸镁 硫酸亚铁 琼脂
20g 1g 0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 20g
3g 5g 10g 15~20g 7.0~7.2 1000mL
水 pH
后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠 磷酸氢二钾 氯化钾 硫酸镁 硫酸亚铁 蔗糖 琼脂 水 pH
121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖 蛋白胨 磷酸二氢钾 七水合硫酸镁
1/3000孟加拉红（rose
bengal，玫瑰红水溶液） 琼脂 pH 蒸馏水
112℃灭菌30min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯
蔗糖（或葡萄糖） 琼脂 pH
1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制：
1000mL 7.2～7.4
配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化
2g 1g 0.5g 0.5g 0.01g 30g 15~20g 1000mL
自然
10g 5g 1g 0.5g 100mL 15—20g
自然 800mL
200g 20g 15—20g
自然
培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至
(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。
(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。
(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
甘露醇（或葡萄糖） 磷酸二氢钾 七水合硫酸镁 氯化钠 二水合硫酸钙 碳酸钙 蒸馏水 pH
113℃灭菌30min。 8、半固体肉膏蛋白胨培养基 肉膏蛋白胨液体培养基 琼脂 pH
121℃灭菌20min。 9、合成培养基 偏磷酸铵 氯化钾 七水合硫酸镁 豆芽汁 琼脂 蒸馏水 pH
加12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。121℃灭菌20min。 10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基 黄豆芽
蔗糖（或葡萄糖） 水 pH
补足原量，再加入蔗糖（或葡萄糖）50g，煮沸熔化。121℃灭菌20min 。 11、油脂培养基 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 香油或花生油 1.6%中性红水溶液 琼脂 蒸馏水 pH
121℃灭菌20min
注：(1)、不能使用变质油。 (2)、油和琼脂及水先加热。 (3)、调好pH值后，再加入中性红。
(4)、分装时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中。
10g 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 1000mL 7.0—7.2
100mL 0.35—0.4g
7.6
1g 0.2g 0.2g 10mL 20g 1000mL
7.0
100g 50g 1000mL
自然
培养基的配制：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。用水
10g 5g 5g 10g 1mL 15—20g 1000mL
7.2
12、淀粉培养基 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 可溶性淀粉 蒸馏水 琼脂
121℃灭菌20min 13、明胶培养基 牛肉膏蛋白胨液 明胶 pH
在水浴锅中将上述成分溶化，不断搅拌。溶化后调pH7.2—7.4。 121℃灭菌30min。 14、蛋白胨水培养基 蛋白胨 氯化钠 蒸馏水 pH
121℃灭菌20min。 15、糖发酵培养基 蛋白胨水培养基 1.6%溴钾酚紫乙醇溶液 pH
另配制20%糖溶液（葡萄糖、乳糖、蔗糖等）各10mL。 培养基的配制：
(1)、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（pH7.6）分装于试管中，在每管内放一倒置的小玻璃管（Durham tube），使之充满培养液。
(2)、将已分装好的蛋白胨水和20%的各种糖溶液分别灭菌，蛋白胨水121℃灭菌20min；糖溶液112℃灭菌30min。
(3)、灭菌后，每管以无菌操作分别加入20%无菌糖溶液0.5 mL（按每10mL培养基中加入20%的糖液0.5mL，则成1%的浓度）。配制用的试管必须洗干净，避免结果混乱。 16、葡萄糖蛋白胨水培养基 蛋白胨 葡糖糖 磷酸氢二钾 蒸馏水
17、麦氏（Meclary）琼脂（酵母菌） 葡萄糖 氯化钾 酵母浸膏 醋酸钠 琼脂
1g 1.8g 2.5g 8.2g 15—20g
5g 5g 2g 1000mL 1000mL 1—2mL
7.6 10g 5g 1000mL
7.6 100mL 12—18g
7.6 10g 5g 5g 2g 1000mL 15—20g
将上述各成分溶于1000mL水中，调pH7.0—7.2，过滤。分装试管，每管10mL，112℃灭菌30min。