—纤维素使用后因带有大量杂蛋白,所以再生时,先用5mol/L NaOH浸洗,用去离子水洗至pH7.0左右,再转型,即可再使用。即用NaOH洗是为了出去杂蛋白,用酸洗是为了是柱材转型。 4.5简述疏水层析的原理和主要步骤。
溶液中高离子强度可以增强蛋白质和多肽等生物大分子与疏水性层析介质之间的疏水作用。利用这个性质,在高离子强度下将待分离的样品吸附在疏水性层析介质上,然后线性或阶段降低离子强度选择性的将样品解吸。疏水性弱的物质,在较高离子强度的溶液时被洗脱下来,当离子强度降低时,疏水性强的物质才随后被洗脱下来。
主要步骤:装柱;柱平衡,将疏水层析介质的疏水基团暴露出来;上柱;用离子强度较强的B液进行洗涤,洗去上样液中不吸附的组份,此外可将待分离的样品吸附在疏水性层析介质上;再用A与B的混合液进行洗脱,由于A液离子强度比B液的低,所以可将之前吸附上的待分离样品组分洗脱下来。
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