液洗一次，可以节约胰酶。
3.再加1ml0.25％胰酶消化，本人体会，新开瓶（指分装的小瓶）使用的胰酶消化能力强，可以减少用量至0.5－0.8ml,已用较久的胰酶如用少了就不管用。
4.镜下观察，如果80％以上细胞都回缩变圆，立刻将培养瓶竖起，防止过度消化。 5.倒掉胰酶，用含10％小牛血清1640培养液5ml加入瓶内，按顺序轻吹打，如瓶底由模糊变透亮，说明细胞已从瓶壁吹离。
6.此种细胞生长较快，所以一般按1传5－6传代，按瓶数补足培养液，吹匀后分别接种到新瓶中。
7.根据培养液颜色变化所提示的酸碱度变化，一般2天左右换液一次。
人脐静脉内皮细胞株ECV304：在含体积分数为10%胎牛血清（FPS）的RPMI1640培养液，37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度条件下培养，3-4d换液传代一次。实验时采用对数生长期细胞。传代时先倒掉旧培养液，用pbs５ml洗两遍，再加入0.25%的胰酶+0.01íta，加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后大约半分钟左右看一次，对着光源观察瓶底细胞黏附面是否有裂缝（如有则在显微镜下可见细胞之间出现间隙且有大部分细胞呈现圆形），倒掉，加入含低浓度血清培养液，然后吹打瓶底各处使细胞脱落。离心后去除上清液，加全培，再分４瓶，补加培养液。这样操作步骤可大大简化，不需要将培养瓶拿出拿进操作台了．
附:消化缓冲液(0.25%)胰蛋白酶：胰蛋白酶干粉1.25g，0.1gEDTA，溶于50ml 10×D-Hanks溶液中，调节至PH 7.6，定容至500ml，22um滤膜过滤除菌，分装后-20℃保存备用