中国林蛙抗菌肽改造肽的抗癌活性筛选
LK2（6） 21.3747 1: 214 nm, 8 nmvydac2012-3-9-28.dat150150Retention Time100100mAU505000-50-5005101520Minutes25303540mAU LK3 17.9547 2001: 214 nm, 8 nmvydac2012-3-9-30.dat200 Retention Time100100mAU0005101520Minutes25303540mAU 图2-3：保留时间来表征改造肽的疏水性
Temporin-1CEa及其改造肽的保留时间从大到小顺序依次为： Temporin-1CEa，LK1，LK2（6），LK2（5），LK3
2.3.4比较Temporin-1CEa及其改造肽对MCF-7细胞增殖的抑制率。
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120Temporin-1CEaLK1LK2(6)LK310080cell viability(%)60402002.5510204060peptide concentration(μM)
图2-4：比较Temporin-1CEa及其改造肽对MCF-7细胞增殖的抑制率
通过软件计算，得出四种改造肽的IC50值为：
肽 IC50（μM） LK1 21.16 LK2（5） 44.84 LK2（6） 14.49 LK3 29.70 表2-1:四种类似物的IC50值
四种改造肽中电荷为+6的LK2（6）的IC50值最小,并且LK1以及LK2(6)的IC50 值均小于模板肽Temporin-1CEa的IC50值。能说明电荷对于阳离子抗菌肽抑制MCF-7的生长有一定的影响。
2.3.5比较Temporin-1CEa及其改造肽对人红细胞的溶血率。
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140Temporin-1CEaLK1LK2(5)LK2(6)LK3120100溶血率（%）8060402002550100肽浓度（μM）200400
图2-5：比较Temporin-1CEa及其改造肽对人红细胞的溶血率
以上结果表明，四种改造肽的溶血活性均小于模板肽Temporin-1CEa。
浓度（μM）
25 50 100 200 400
Temporin-1CEa及其改造肽溶血率 Temporin-1CEa LK1 LK2(5) 7.304906 4.637337 0.35672 60.06858 5.511849 2.03775 123.2985 7.24115 4.43825 126.3556 8.620618 5.7531 132.8807 23.87753 18.0856
表2-3四种改造肽的溶血活性 LK2(6) 2.49703 3.65331 5.86857 8.02437 21.0703
LK3 0.11891 1.49837 3.29746 5.15341 9.40297
以上结果表明，四种改造肽的溶血活性均小于模板肽Temporin-1CEa，并且四种改造肽在抑癌浓度范围（IC50值）内，除改造肽LK1的溶血率大于5%，其他三种改造肽的溶血率在此范围内均小于5%[19]。
2.4讨论
抗菌肽的发展目标是优化的疏水性，最大限度地减少真核细胞的细胞毒性，并最大限度地发挥抗菌活性，这反过来又优化治疗效果[14]。在抗菌和溶血活性方面疏水性作用和净正电荷有重要性。此外，我们已经证明，疏水性有一个临界值，可取得最佳的抗菌活性[15]。也就是说，减少对非极性面肽的疏水性，能降低抗菌的活动；同时增加肽的净正电荷，提高抗菌活性直到达到最佳，进一步提高疏水
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性超出最佳范围，就会减少抗菌活性[16]。
本文研究以Temporin-1CEa为模板，对其阳离子性进行改造，成功的设计了4种Temporin-1CEa的类似物：LK1，LK2(5)，LK2(6)，LK3。其中LK2(6)最好，IC50值最低溶血活性很小，净正电荷是多数天然抗菌肽的重要特征,是影响其与膜上基团识别结合的关键[17]。多数致病菌和病变细胞的细胞膜呈电负性,在抗菌肽穿膜过程中,一般认为抗菌肽首先通过静电相互作用结合在膜上,随后疏水结构域插入到膜中,或破坏膜,或形成离子通道,致细胞死亡[18]。
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致谢
本研究及毕业论文是在王澈老师的亲切关怀和悉心指导下完成的。王老师严肃的科学态度，严谨的治学精神，精益求精的工作作风，深深地感染和激励着我，鼓舞我在今后的学习中刻苦钻研，开阔思路。在论文完成之际，感谢王老师这几个月来的关心和帮助。同时感谢学姐周扬在学业上给我以精心指导，无论是专业知识，还是实验技术，都给了我非常大的帮助，在此谨向她们致以诚挚的谢意。我还要感谢毕业论文组同学们的鼎立相助，在此对他们表示深深的谢意！ 最后，再次对关心、帮助我的老师和同学们表示衷心地感谢！
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