入显色液，避光显色至出现条带时立即放入双蒸水中终止反应。
四、实验结果及分析
1. PCR 结果
口蹄疫RNA反转录的cDNA与口蹄疫VP1基因阳性质粒进行PCR，1%的琼脂糖凝胶电泳显示，cDNA PCR在600bp附近有一条较清晰的条带（左箭头），同时还有较为明显的引物二聚体，阳性质粒在600bp附近有一条明亮清晰的条带（右箭头）。结果可知PCR扩增出了VP1基因，但浓度较低。原因可能是cDNA量太少。（图1）
图1 PCR扩增的凝胶电泳结果
2. PCR 纯化
对阳性质粒与cDNA的PCR结果进行切胶回收，凝胶结果上几乎看不到条带，同组的条带是maker后的一号孔口，条带隐约可以看见，而其他组可以明显看到大于600bp的片段。造成的原因可能是初次切胶没有把含有较多DNA胶切下来，从而使得纯化的DNA的浓度过低，凝胶上没有条带出现。（图2）
图2 PCR纯化结果
3. 连接产物的转化结果
将感受态细胞与连接产物进行转化，培养16小时后，可观察到在平板上长出白色的单菌落，菌落数量较多，大小均一，说明感受态细胞制备成功，连接产物的转化较好。（图3）
图3 转化结果
4. 质粒的抽提结果
1%琼脂糖凝胶电泳结果显示出现较亮的条带，与marker相比，而出提取出的质粒的浓度高且质粒基本没有开环断裂，实验较为成功。（图4）
图4 质粒的抽提结果
5. 重组质粒的酶切鉴定结果
经RcoR I和BamH I酶切后，琼脂糖凝胶电泳可以看到两条条带，说明质粒进行双酶切后，环形质粒被酶切为质粒载体（约为3000bp）和目的条带（约为600bp），说明目的条带成功的连接到质粒上并且可以在大肠杆菌中复制。但目的条带较弱，说明复制量不高。(图5)
图5 重组质粒的酶切鉴定结果
6. SDS-PAGE 结果
SDS-PAGE电泳结果看到较为明显的阳性条带，说明蛋白在大肠杆菌内表达。（图6）
图6 SDS-PAGE结果
7.Western Blot 结果
在硝酸纤维素薄膜上可以看到有清晰的阳性条带，说明此次表达的蛋白是目的蛋白。但是中间的条带有明显的拖带现象，造成的原因可能是上样量太多，蛋白浓度较大而进行分离胶的电泳时使用为80v电压，时间不够久，导致不能有效的将蛋白分开（图7）
图7 Wester Bolt 结果
五、实验总结与讨论：
1. 在口蹄疫病毒的总RNA的提取过程中，并没有严格的在超净工作台中进行，但实
验后的RNA进行反转录和PCR扩增均有阳性结果。说明此次使用的口蹄疫病毒强毒株的总RNA提取较为容易。
2. PCR产物的纯化切胶时，由于第一次切胶，没有把目的胶带正确的切下来，导致获
取的目的DNA较少，下一步跑胶时没有出现较明显的条带。
3. 连接转化后，大肠杆菌在氨苄青霉素抗性的培养基上生长出的菌落与其他组对比
较少，分析原因为，纯化的目的DNA浓度较低，连接效率不高，使得长出的阳性菌落较少或是由于制作的感受态细胞由于机械外力作用破裂，如：Cacl2重旋用力过大，或是涂板方式不正确等。
4. 口蹄疫病毒VP1基因的表达的整个的实验过程，要提前做好实验准备工作，正确
操作，搞懂每步骤作用和注意事项，避免出错，才可以将所需要的蛋白表达出来。因此在以后的试验中要多加练习自己不熟悉的实验操作，减少不必要的操作失误，才有可能提高实验的成功率。
5. 通过本次实验让我更加了解分子生物学技术基本原理和方法，为以后进行相关研
究打下基础。