取葛根粗粉100g于1000ml圆底烧瓶中，加300ml95%乙醇回流提取2小时，过滤，残渣再用200ml乙醇回流提取一次（1小时），过滤，合并二次醇提液，于水浴上回收乙醇至150ml，转移到烧杯中，加饱和中性醋酸铅溶液至不再有沉淀析出为止，过滤。滤液加饱和碱式醋酸铅至不再有沉淀析出为止，抽滤，沉淀用水洗二次后悬浮于150ml甲醇中，通入H2S气体分解黄酮铅盐沉淀，而转为硫化铅沉淀，抽滤除去硫化铅沉淀，并用甲醇洗2～3次，洗液与滤液合并，中和至pH6.5～7，于水浴上减压回收乙醇至30ml左右，转移到蒸发皿中蒸干，即得总黄酮，称重，计算产率。
（二）葛根总黄酮的分离
1、装柱：将适量中性氧化铝（100～200目）用水饱和的正丁醇混悬后，常规湿法装柱，混悬用溶剂体积V1和装柱后放出溶剂体积V2，计算柱中溶剂保留体积V。
V=V1-V2
这样便于掌握流分的接受，溶剂的更换。
2、加样和洗脱：将葛根总黄酮用水饱和的正丁醇溶解后装入氧化铝柱上，待样品完全被氧化铝柱吸附后加入水饱和正丁醇开始洗脱，等色带到达柱底（用紫外光观察控制），于紫外灯下可看到十种色带，由底至顶分别命名为a～j，其中c没有荧光，其它九个色带均显紫蓝色荧光，分段接收洗脱液，可使葛根总黄酮中各个化合物得以分离。
B流分减压回收溶剂，残渣用50%甲醇重结晶得大豆黄酮，c流分同法处理得大豆黄酮苷，e流分同法处理得葛根素，f流分为葛根素木糖苷。
（三）鉴定
1、纸层析
支持剂：新华层析滤纸，长30cm，宽酌情而定。 点样：取少量总黄酮用1ml乙醇溶解即为样品溶液。 展开剂：20%KOH乙醇溶液，上行展开。
显色：展开后用铅笔画下前沿，将滤纸在烘箱中烤干后（滤纸放入烘箱前须自然晾干），于紫外灯下观察，划出荧光位置，求出Rf值。
附：据文献记录，大豆黄酮Rf0.04，大豆黄酮苷Rf0.23，葛根素Rf0.50。 2、薄层层析
吸附剂：硅胶G板，于110℃烘半小时。
样 品：取少量总黄酮用1ml乙醇溶解即为样品溶液。 展开剂：氯仿-甲醇（83:17）
显色剂：三氯化铁-铁氰化钾试剂 划出各色点的位置，求出Rf值。
四、思考题
1、葛根中黄酮类化合物结构上有何特点？
2、本实验中，为什么中性醋酸铅不能沉淀葛根中的黄酮类化合物？ 3、为什么中性氧化铝可用于葛根中黄酮类化合物的层析分离？试说明葛根素、葛根苷、大豆黄酮及大豆黄酮苷在氧化铝层析中被洗出先后顺序的理由。
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实验六 黄夹苷的提取、精制及鉴定
黄夹苷是从夹竹桃科植物黄花夹竹桃（Thevetia peruviana （Pers） K. Schum）的果仁经发酵后提出的亲脂性次生苷的混合物，主要成分为黄夹次苷甲、黄夹次苷乙和单乙酰黄甲次苷乙，商品名为强心灵。
黄夹苷具有强心作用，主要用于因心脏病引起的心力衰竭，阵发性室上性心动过速、阵发性心房纤颤等症的治疗。
黄夹苷中主要化学成分的结构及性质
0
1、黄夹次苷甲（Peruvoside）：菱形白色结晶(稀甲醇)，mp..161～164℃，[α]D -67.7（甲醇）。在水中的溶解度为1:2500，易溶于氯仿和丙酮，微溶于甲醇和乙醇。
0
2、黄夹次苷乙（Nerrifolin）：白色结晶(甲醇)，mp.203～207℃，[α]D -52.7（甲醇）。
0
3、单乙酰黄夹次苷乙（Cerberin）：白色针状结晶(甲醇-水)，mp.215～218℃，[α]D -82.4（甲醇），有毒。可溶于乙醇、氯仿、乙酸及乙醚，几乎不溶于水。
黄夹苷主要为以上三个化合物的混合物，为白色结晶，无嗅，味极苦。易溶于乙醇、甲醇、氯仿、丙酮，微溶干乙醚、水，不溶于苯及石油醚。
OOR1CHOCH3CH32R1HHOCCH3RHHOCH3HOH3OR1OOOCH3
一、实验目的要求
1、学习黄夹苷的提取，精制方法及原理。
2、掌握强心苷的性质，定性鉴别反应，纸层析和薄层层析鉴定。
3、学习通过薄层层析检查酶解前后黄花夹竹桃果仁中所含成分之变化的方法。
二、实验原理
1、在黄花夹竹挑果仁中含有原生苷，同时还含有酶，在适宜的温度和湿度下，利用酶的活性可使原生苷水解为次级苷，然后用乙醇提取。
2、通过纸层析，薄层层析和颜色反应对黄夹苷进行检识和确认。
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三、实验方法
（一）黄夹苷的提取和精制
1、原料处理：称取黄花夹竹桃坚果150克，除去硬壳，将所得果仁称重后置乳体中研成粗粉，称重。
2、脱脂：将研细的果仁粉末包在滤纸袋内置于沙氏提取器中，用苯脱脂。脱脂是否完全，可用滴管吸取沙氏提取器上部的萃液，滴在滤纸上若不留油迹，说明已脱脂完全。将脱脂果仁粉末干燥，称重。 3、酶解：将干燥后的脱脂果仁粉末置三角烧瓶中加40℃的水适量以能完全湿润为度（约为果仁粉末的3～5倍量），再加脱脂果仁粉末重量的2.5%的甲苯，加盖，并稍留有空隙，在35～40℃的恒温箱中酶解24小时，观察发酵物的颜色及发酵液pH值的变化，并用薄层层析（TLC）检查酶解前后成分的变化情况。
检查方法：取脱脂粉末少许，加适量甲醇振摇10分钟，得甲醇提取液；另取少许发酵后的粉末加适量氯仿振摇10分钟，得氯仿提取液。将二样品液点于薄层板上进行层析分析。 吸附剂：中性氧化铝软板，200～300目，Ⅲ级。 展开剂：氯仿—甲醇（97:3）。
显色剂：50％硫酸水液或乙醇液喷后于105℃烤10分钟。
4、提取：于发酵后的粉末中加15倍量（相当于脱脂粉末重）95％乙醇，最于500ml三角烧瓶中，振摇10分钟，减压过滤，残渣再用5倍量乙醇振摇提取，减压过滤，抽于，残渣于布氏漏斗上用适量乙醇洗一次，合并提取液，减压回收乙醇至脱脂粉末的5倍量体积，加脱脂粉末的12.5倍量水放置，待析出沉淀，过滤，干燥，称重，得粗黄夹苷。
5、精制：取上述黄夹苷粗品加40倍量95％乙醇，加热回流10分钟，稍放冷，再加粗品量15％活性炭（脱色）加热回流10分钟，过滤，滤液减压浓缩至粗品5倍量体积，再缓缓加入浓缩液体积3倍量的蒸馏水，放置待析晶完全后，抽滤，结晶以少量乙醚洗净，于70℃干燥，称重，即得黄夹苷精品，计算产率。
（二）黄夹苷的定性鉴别反应
1、3，5—二硝基苯甲酸（Kedde）反应 取少量样品于小试管中，加1ml乙醇溶解后加人4％氧氧化钠乙醇溶液2滴，再加2％3，5—二硝基苯甲酸甲醇溶液2滴，观察颜色变化（强心苷溶液应呈紫红色）。 2、碱性苦味酸（Baljet）反应
取少量样品于小试管中，加1ml乙醇溶解后再加2滴碱性苦味酸试剂，放置15分钟，观察现象（强心苷溶液应呈橙红色）。
3、三氯化铁—冰醋酸（Keller—Kiliani）反应
取少量样品置于小试管中，加入0.5％FeCl3的冰醋酸溶液2ml使之溶解，然后沿管壁加人浓硫酸1m1，观察现象（若有α—去氧糖则两液界面呈棕色，渐变为浅兰色，最后冰醋酸层全呈现兰色）。
（三）黄夹苷的色谱鉴定
1、纸层析鉴定
（1）滤纸的处理：取28×4.5cm的层析用滤纸二条，使其均匀地通过盛有甲酰胺-丙酮（3:7）的溶液的平皿，然后置空气中风干15分钟后待用（可先将浸透甲酰胺-丙酮的层析滤纸于干净的普通滤纸中压干）。
（2）点样：取自制黄夹苷精品及黄夹苷标准品5mg溶于氯仿中，用于点样。 （3）展开剂：甲酰胺饱和的二甲苯一甲乙酮（1:1）的上层液。
（4）展析操作：将点样后的滤纸条置于层析筒中，以展开剂饱和半小时后，在室温中上
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行展开，至溶剂前沿达约20cm时（约3小时），取出纸条在空气中晾干后，置恒温箱中，于120℃烤l小时（除尽滤纸上的甲酰胺）或于电炉上烤至无白烟，然后显色。 （5）显色：用Kedde试剂喷雾显色，试剂的组成为： A：2%3，5—二硝基苯甲酸甲醇溶液。 B：5％氢氧化钠乙醇溶液。
显色时分别在纸上喷以两种显色剂，强心苷应呈红色斑点，画下色点位置，计算Rf值。 2、薄层层析鉴定
（1）点样：取自制黄夹苷精品及黄夹苷标准品名5mg，分别溶于1ml甲醇中，用于点样。 （2）吸附剂：硅胶G硬板（含10％石膏的硅胶板）。 （3）展开剂：氯仿一甲醇（10：1）。
（4）显色：喷50％硫酸水溶液，于105℃烤10分钟。
样品可呈现与标准品Rf值相同的一些斑点，其中主要有三个斑点，Rf值由小到太，顺次为黄甲次苷甲、黄甲次苷乙、单乙酰黄甲次苷乙。以黄夹次苷乙含量最高，在黄夹次苷甲和黄夹次苷乙之间，黄夹次苷乙和单乙酰黄夹次苷乙之间允许各有一个小而弱的强心苷斑点，靠近原点处，有时可出现另一个颜色极浅的斑点，除此之外，不应出现其它斑点。
四、思考题
1、本实验中进行酶解时应注意些什么问题？为什么要加甲苯？ 2、纸层析展后，为什么要于120℃烤1小时？
3、分析纸层析和薄层层析结果，哪个成分的Rf值应大？哪个成分的Rf值应小？为 什么？
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实验七 薯蓣皂苷元的提取分离和鉴定
薯蓣皂苷属27碳甾体皂苷，水解后可得薯蓣皂苷元，薯蓣皂苷元因为是合成甾体激素类药物的主要原料而受到重视。
薯蓣皂苷主要存在于薯蓣科（Dioscoreaceae）植物中，我国薯蓣科植物有80多种，多数分布长江以南省区，其中可作为原料药的有12种3变种，均为薯蓣属根状茎组（Dioscorea，Sect. Stenophora）植物，重要的有盾叶薯蓣（D. zingiberensis）、黄山药（D. panthaica）、 穿山龙（D. nipponica）等。本实验采用穿山龙为原料提取薯蓣皂苷元。
穿山龙含多种甾体皂苷，其中薯蓣皂苷含量最高。这些皂苷水解后大多能生成薯蓣皂苷元，暮蓣皂苷元含量约2％。
主要化学成分的结构及性质 1、薯芋皂苷元（Diosgenin）（1）：白色针状结晶(乙醇)，mp.204~207℃。可溶于一般有机溶剂，不溶于水。
2、薯蓣皂苷（Dioscin）（2）：白色针状结晶或粉末状（乙醇），mp.275~ 280℃。可溶于甲醇、乙醇，难溶于乙醚等低极性有机溶剂，不溶于水。
OOR12Hglu2611rharhaRO
一、实验目的要求
1、掌握从穿山龙中提取分离薯蓣皂苷元的原理和方法。 2、学习薯蓣皂苷元的鉴定方法。
二、实验原理
穿山龙中所含甾体皂苷经水解处理，裂解产物主要为薯蓣皂苷元和单糖等，利用薯蓣皂苷元不溶于水，可溶于有机溶剂的性质可将其用有机溶剂提取分离。
三、实验方法
（—）发酵和水解
将切成薄碎片的穿山龙生药50g置于500ml锥形瓶中，加水约l00ml，浸泡12小时后置于40℃恒温水浴中自然发酵48小时。然后加入150ml水和20ml浓硫酸摇匀，小火加热保持微沸水解约2小时。倾出酸液，用10％氢氧化钠溶液将药渣搅匀洗至中性，再用水充
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