中药化学实验讲义-2011(8)

2019-06-11 13:02

检查挥发油、油脂、萜类、甾体化合物等成分用。

(二)各类成分的检查

1、检查生物碱类

取上述酸性乙醇提取液先用稀氨水调至中性,再于水浴上蒸干,残渣加5%硫酸5ml溶解后,过滤,滤液供以下实验用。

(1)碘化铋钾试验:取滤液1ml,加入碘化铋钾试剂1~2滴,如有桔红色沉淀产生,即表示可能有生物碱。

(2)碘化汞钾试验:取滤液1ml,加入碘化汞钾试剂1~2滴,如有浅黄色或白色沉淀产生,即表示可能有生物碱。

(3)硅钨酸试验:取滤液1ml,加入硅钨酸试剂1~2滴,如有浅黄色或灰白色沉淀产生,即表示可能有生物碱。

2、检查氨基酸、多肽和蛋白质类

(1)加热沉淀试验:取冷水浸液1ml,加热煮沸,如产生浑浊或沉淀,即表示可能有蛋白质。

(2)双缩脲试验:取冷水浸液1ml,加入10%氢氧化钠水溶液2滴,摇匀,再滴加0.5%硫酸铜水溶液1~滴,摇匀,如显红色、红紫色或紫色,即表示可能有多肽、蛋白质。 (3)茚三酮试验:取冷水浸液1ml,加入0.2%茚三酮乙醇溶液2~3滴,摇匀,于沸水浴中加热5分钟,冷却后,如显蓝色或蓝紫色,即表示可能有氨基酸、多肽、蛋白质。

(4)吲哚醌试验:取冷水浸液滴于滤纸片上,干燥后,喷洒吲哚醌试剂,于120℃加热5分钟,若斑点显各种颜色,即表示可能有氨基酸。 3、检查还原糖、多糖和苷类

(1)菲林反应:取热水提取液1ml,加入新配制的菲林试剂4~5滴,在沸水浴上加热5分钟,如产生砖红色沉淀,即表示有还原糖或其它还原性物质。若现象不明显,可另取热水提取液4ml,加入10%盐酸1ml于水浴上加热10分钟使其水解,冷却后,若有沉淀应过滤,然后加入5%氢氧化钠水溶液调至中性,再加菲林试剂1ml,于沸水浴上加热5分钟,如产生砖红色沉淀,即表示可能有多糖或苷类。

(2)α-萘酚试验:取热水提取液1ml,加入5%α-萘酚乙醇液2~3滴,摇匀,沿试管壁缓缓加入浓硫酸1ml,如在试液与硫酸的交界面产生紫色或紫红色环,即表示有糖类、多糖或苷类。

(3)多糖的试验:取热水提取液5ml,于水浴上蒸发至1ml,再加95%乙醇5ml,若产生沉淀,过滤,用少量乙醇洗涤沉淀,再将沉淀溶于3ml水中,加入10%盐酸1ml,在水浴上加热10分钟使其水解,冷却后,加5%氢氧化钠水溶液调至中性,然后加入菲林试剂1ml,于沸水浴上加热5分钟,如产生砖红色沉淀,即表示有多糖。 4、检查皂苷类

(1)泡沫试验:取热水提取液1~2ml置于试管中,密塞,激烈振摇2分钟,如产生大量持续性泡沫,且放置10分钟以上,或加热,或加入乙醇泡沫均无明显地减少,即表示可能有皂苷。

(2)醋酐-浓硫酸反应:取热水提取液2ml,置于小瓷蒸发皿中,于水浴上蒸干,残留物加冰醋酸1ml溶解,再加醋酐1ml,浓硫酸1滴,如反应液颜色由黄→红→紫→蓝→污绿色,即表示可能有甾体皂苷,如反应液颜色由黄→红色不呈污绿色,即表示可能有三萜皂苷。 (3)溶血试验:取热水提取液滴于滤纸片上,等干燥后,喷洒红细胞悬浮液,数分钟后,在红色背景中如出现白色或淡黄色斑点,即表示可能有皂苷。

5、检查有机酸类

(1)pH试纸试验:取热水提取液及乙醇提取液,分别用pH试纸检查其pH值,如呈酸

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性,即表示可能有游离羧酸或酚性化合物。

(2)溴酚蓝试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上,待干燥后,喷洒0.1%溴酚蓝的70%乙酸溶液,如在蓝色背景上显黄色斑点,即表示可能有有机酸。若斑点不明显,可再喷洒氨水,然后暴露在盐酸蒸气中,背景逐渐由蓝色变黄色,而有机酸斑点仍显蓝色。溴酚蓝变色范围是:3.0(黄色)~4.6(紫色)。

(3)溴甲酚绿试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上,待干燥后,喷洒0.04%溴甲酚绿乙醇溶液,如蓝色背景上显黄色斑点,即表示可能有有机酸。溴甲酚绿变色范围是:3.8(黄色)~5.4(蓝色)。

6、检查酚类化合物和鞣质类

(1)三氯化铁试验:取热水提取液及乙醇提取液各1ml,(若提取液为酸性,可直接进行检查,若为碱性应先加醋酸酸化),加1%三氯化铁试剂1~2滴,如反应液呈绿色、蓝绿色、墨绿色、蓝紫色,即表示可能有酚类化合物或鞣质。

(2)三氯化铁—铁氰化钾反应:取热水提取液及乙醇提取液分别滴于滤纸片上,待干燥后,喷洒三氯化铁—铁氰化钾试剂,如斑点呈蓝色,即表示可能有酚类、鞣质或还原性化合物。

(3)香草醛—盐酸反应:取热水提取液及乙醇提取液分别滴于滤纸片上,待干燥后,喷洒香草醛—盐酸试剂,如斑点呈不同程度的红色,即表示有间苯二酚和间苯三酚化合物。 (4)明胶试验:取热水提取液1ml,加入氯化钠—明胶试剂2~3滴,如有沉淀产生,即表示可能有鞣质。

7、检查甾体及三萜类化合物

(1)醋酐-浓硫酸反应:取乙醇提取液2ml,置于小瓷蒸发皿中,于水浴上蒸干,残留物加冰醋酸1ml溶解,再加醋酐1ml,然后滴加浓硫酸1滴,如反应液颜色由黄→红→紫→蓝→污绿色,即表示可能有甾体化合物,如反应液颜色仅由黄→红→紫红色,即表示可能有三萜类化合物。

(2)氯仿-浓硫酸反应:取乙醇提取液2ml,置于小瓷蒸发皿中,于水浴上蒸干,残留物加氯仿1ml溶解,并转移至小试管中,沿管壁加入浓硫酸1ml,如氯仿层显红色或青色,硫酸层于紫外光灯下观察有绿色荧光,即表示可能有甾体化合物。

8、检查黄酮类化合物

(1)盐酸—镁粉反应:取乙醇提取液1ml,加入镁粉少许,再加入浓盐酸2~3滴(必要时水浴加热),如反应液或产生的泡沫显红~紫红色,即表示可能有黄酮类化合物。 (2)三氯化铝反应:取乙醇提取液滴于滤纸片上,待干燥后,喷洒1%三氯化铝乙醇溶液,如斑点呈黄色,于紫外灯下检视呈明显的黄色或黄绿色荧光,即表示可能有黄酮类化合物。

(3)氨熏试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上,待干燥后,置于浓氨水瓶上熏半分钟,如斑点显黄色或黄色加深,当滤纸片离开氨蒸气数分钟后,黄色减弱或消退;另将氨熏后的滤纸置于紫外光灯下检视,斑点呈黄色荧光,即表示可能有黄酮类化合物。

9、检查内酯、香豆素及其苷类

(1)荧光试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上,待干燥后,于紫外灯下检视,如斑点呈蓝色荧光,喷洒1%氢氧化钾试剂后斑点有荧光颜色转变为黄绿色,即表示可能有香豆素及其苷类。

(2)重氮化反应:取乙醇提取液1ml,加3%碳酸钠水溶液1ml于沸水浴上加热3分钟,冷却后,加人新配制的重氮化试剂1~2滴,如显红色,即表示可能有香豆素及其苷类。 (3)异羟肟酸铁反应:取乙醇提取澈1m1,加7%盐酸羟胺甲醇液3~5滴和10%氢氧化钾甲醇液10滴,于水浴上加热至反应开始(有气泡产生),冷却,再加人5%盐酸使成弱酸

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性,加1%三氯化铁水溶液5滴,如反应液有橙红色或紫红色出现,即表示可能有酯类、内酯类、香豆素及其苷类。 10、检查强心苷类

(1)3,5一二硝基苯甲酸反应(Kedde反应):取乙醇提取液1m1,加3,5一二硝基苯甲酸试剂3~4滴,如反应液呈红色或紫色,即表示可能有强心苷。

(2)碱性苦味酸反应(Baljet反应):取乙醇提取液1ml,加碱性苦味酸试剂1~2滴,如反应液呈橙色或红色,即表示可能有强心苷。 (3)亚硝酰铁氰化钠反应(Legal反应):取乙醇提取液1ml,置于小瓷蒸发皿中,于水浴上蒸干,残留物加吡啶1ml溶解,再加0.3%亚硝酰铁氰化钠溶液4~5滴,混匀,再加入氧氧化钠溶液1~2滴,混匀,如反应液呈红色,且颜色又逐渐消退,即表示可能有强心苷。 11、检查蒽醌类

(1)碱液试验(Borntrager反应):取乙醇提取液lml,加入10%氢氧化钠水溶液1ml,如反应液呈红色,再加30%过氧化氢5滴,加热后,红色不消退,用5%盐酸酸化后,如红色消退,即表示有蒽醌及其苷类。 (2)醋酸镁反应:取乙醇提取液1ml,加1%醋酸镁甲醇溶液1~2滴,如反应液呈红色,即表示有蒽醌及其苷类。

(3)硼酸溶液试验:取乙醇提取液滴于滤纸片上,待干燥后,喷洒1%硼酸水溶液,如斑点呈橙黄色或红色,且于紫外灯下检视有荧光,即表示有蒽醌及其苷类。 12、检查挥发油、油脂类

(1)油斑试验:取石油醚提取液滴于滤纸片上,如油斑在室温下可挥发不留痕迹,即表示可能有挥发油;如油斑不消失,即表示有油脂类。

(2)磷钼酸试验:取石油醚提取液滴于滤纸片上,喷洒25%磷钼酸乙醇液,115~118℃加热2分钟,如斑点呈蓝色,背景为黄绿色或藏青色,即表示有油脂、三萜及甾醇类。 (3)香草醛—硫酸试验:取石油醚提取液滴于滤纸片上,喷洒香草醛—6%硫酸试剂,如斑点呈红、蓝、紫等各种颜色,即表示可能有挥发油、萜类和甾醇类。 (三)圆型滤纸层析法

取一张圆型滤纸,在距圆心1.0~1.5cm周围用毛细管点加样品,一张滤纸可同时点6~8个样品,待点样溶剂挥发后,在滤纸圆心处穿入一滤纸芯,然后放在合适的培养皿中,使纸芯与培养皿中的展开剂接触,于圆型滤纸上加盖培养皿盖,进行层析。当溶剂前沿接近培养皿边缘时,取出滤纸,挥干溶剂后显色,根据样品斑点颜色,可确定样品中的成分。

1、检查有机酸类 展开剂:95%乙醇 样品:① 热水提取液 ② 乙醇提取液

③ 柠檬酸乙醇溶液(对照品)

显色剂:0.1%溴酚蓝试剂,有机酸斑点呈黄色。 2、检查挥发油类 展开剂:95%乙醇 样品:① 乙醇提取液 ② 石油醚提取液 显色剂:先观察滤纸上有无油迹斑点,如有油迹斑点,可将滤纸加温烘烤,若油斑消失,则表示有挥发油存在。

(四)各类成分的层析检查

中药化学成分的预试验除用上述的定性反应外,还可用层析法进行,它不仅可以减少

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成分间的相互干扰,展析结果容易判断,还可以根据层析所用的条件加展开剂的组成,层析种类以及色斑的比较值(Rf值),初步判断样品中所含化学成分的极性大小和溶解性能,甚至可以通过和标准样品对照,初步确定样品中含有何种化合物。

用层析法预试各类化学成分的参考层析条件如下: 1、生物碱类:

(1)氧化铝层析(中性、碱性) 展开剂:氯仿—甲醇(9:1) 苯—乙醇(8:2) 显色剂:改良碘化铋钾试剂 (2)硅胶G层析

展开剂:环己烷—二乙胺(9:1)

氯仿—丙酮—二乙胺(5:4:1)

二甲苯—正丁醇—甲醇—二乙胺(40:40:6:2) 显色剂:改良碘化铋钾试剂 2、氨基酸类 (1)纸层析

移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:茚三酮试剂 (2)硅胶G层析

展开剂:正丁醇—醋酸—水(4:1:1) 显色剂:茚三酮试剂

3、糖类 (1)纸层析

移动相:乙酸乙酯—吡啶—水(2:1:2) 显色剂:茴香胺—邻苯二甲酸试剂 (2)硅胶G层析

展开剂:丁酮—醋酸—水(6:1:3)

乙酸乙酯—甲醇—醋酸—水(12:3:3:2) 显色剂:茴香胺—硫酸试剂

4、皂苷类

(1)硅胶G层析

展开剂:正丁醇—乙醇—25%氨水(7:2:5) 氯仿—甲醇—水(65:35:10)

显色剂:喷雾10%硫酸乙醇液后于100℃左右加热数分钟 (2)氧化铝层析

展开剂:己烷—乙酸乙酯(7:3) 苯—乙酸乙酯(7:3) 显色剂: 5、有机酸类 (1)纸层析

移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层

显色剂:喷雾0.1%溴酚蓝乙醇液后于110℃加热数分钟 (2)硅胶G层析

展开剂:苯—甲醇—醋酸(79:14:7)

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显色剂:喷雾0.1%溴酚蓝乙醇液后于110℃加热数分钟

6、酚类、鞣质 (1)纸层析

移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:1%三氯化铁乙醇溶液 (2)硅胶CMC—Na层析

展开剂:氯仿—丙酮(9:1) 显色剂:1%三氯化铁乙醇溶液

7、黄酮类化合物 (1)聚酰胺层析

展开剂:水—乙醇—乙酰丙酮(4:2:1)

显色剂:于紫外灯下检视,① 氨熏,② 1%三氯化铝乙醇溶液 (2)纸层析

移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层

显色剂:于紫外灯下检视,① 氨熏,② 1%三氯化铝乙醇溶液 (3)硅胶G层析

展开剂:乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(5:3:1:1)

显色剂:于紫外灯下检视,① 氨熏,② 1%三氯化铝乙醇溶液

8、香豆素类 (1)硅胶G层析

展开剂:甲苯—甲酸乙酯—甲酸(5:4:1) 石油醚—乙酸乙酯(5:1) 显色剂:于紫外灯下检视,重氮化试剂 (2)纸层析

移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 显色剂:于紫外灯下检视,重氮化试剂

9、强心苷类 (1)硅胶G层析

展开剂:乙酸乙酯—吡啶—水(5:1:4)

二氯甲烷—甲醇—甲酰胺(80:19:1) 显色剂:碱性3,5-二硝基苯甲酸试剂 (2)纸层析

移动相:氯仿—四氢呋喃—甲酰胺(50:50:6.5) 二氯甲烷—甲醇—甲酰胺(50:50:4) 显色剂:碱性3,5-二硝基苯甲酸试剂

10、蒽醌类

(1)硅胶CMC—Na层析

展开剂:苯—乙酸乙酯(8:2)

石油醚—甲酸乙酯—甲酸(15:5:1) 显色剂:① 氨熏,② 5%氢氧化钾乙醇溶液 (2)纸层析

移动相:正丁醇—醋酸—水(4:1:5)上层 甲苯—醋酸—水(5:5:1)

显色剂:① 氨熏,② 5%氢氧化钾乙醇溶液

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