的HIV（1+2）抗体。
【HIV筛查试验操作程序】 （一） 试验前准备：
1. 试验开始前将试剂和样品放置于室温（18~23℃）半小时。 2. 换隔离衣，戴好帽子、口罩、双层手套。
3. 缓冲液配制：用蒸馏水1：25倍稀释，现用现配。或液体内有结晶，应放置
在37℃直至溶解。 （二） 试验操作：
1、装好所需使用数目的孔条。设空白对照孔2孔，2个阴性对照孔，3个HIV-1阳性对照孔。
2、每孔加入100ul待检样品及对照（对照要后加），可振摇15S。 3、覆盖粘胶纸，37±2℃孵育60±2min。
4、置洗板机上洗涤5遍（用洗液将反映孔完全加满，静置30S，共洗涤5遍，洗完后孔上方及底部不应残存液体，禁止在滤纸上拍干）。
5、每孔加酶结合物100ul，取新粘胶纸覆盖反应板，37±2℃孵育30min。 6、同步骤4。
7、每孔加入底物缓冲液50ul，TMB50ul，混匀，不必覆盖粘胶纸，37±2℃孵育10min。
8、每孔加入50ul 1M硫酸终止反应，充分混匀。
9、在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm，或双波长450/630nm测OD值。 （三） 试验结果 1、NC≤0.08
2、Cut off值＝阳性对照值×10%
3、标本OD值小于Cut off为阴性，大于或等于Cut off为阳性
（四） 报告：对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。
三、英科新创 【方法】胶体金法
【原理】本试剂盒采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定血清样本中的
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HIV1/2型抗体。血清阳性样本中HIV抗体与胶体金标记抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的重组Au－HIV（1+2）－Ag则在对照线处与抗HIV单克隆抗体结合而富集显色。 阴性标本则仅在对照线处显色，30分钟内观察结果即可。
【HIV筛查试验操作程序】 （一） 试验前准备：
1、试验开始前将试剂和样品放置于室温（18~23℃）半小时，编号。 2、戴好帽子、口罩、双层手套。
3、将所需测试卡从包装盒中取出，置于台面上。 （二） 试验操作：
1、用微量加样器取60ul样本血清，加到测试卡的加样处。
2、加样后，阳性标本可在1~30分钟内检出。30分钟后观察结果将造成影响。 （三） 试验结果
阳性：测试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测的紫红色条带隐约可见，应用酶免试剂重复检测。
阴性：测试卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。 失效：对照区未出现紫红色条带。
【方法】双抗原夹心酶联免疫法
【原理】采用双抗原夹心两步法检测人血清或血浆样本中的HIV抗体。当待检样本中存在HIV抗体时，在反应过程中形成“固相HIV抗原－HIV抗体－酶标记HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。 【HIV筛查试验操作程序】 （一）试验前准备：
1. 试验开始前将试剂和样品放置于室温（18~25℃）半小时，编号。 2. 换隔离衣，戴好帽子、口罩、双层手套。
3. 缓冲液配制：用蒸馏水1：19倍稀释，现用现配。或液体内有结晶，应放置
在37℃直至溶解。 （二）试验操作
1.按顺序分别在相应孔加入50ul待测样品及阴、阳性对照血清。 2.覆上封板膜，置37℃温育30min.
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3.用洗涤液充分洗涤5次（每次应保持30~60秒浸泡时间），扣干。 4.分别在每孔中加入酶标抗原100ul。 5.覆上封板膜，置37℃温育30min。
6.用洗涤液充分洗涤5次（每次应保持30~60秒浸泡时间），扣干。 7.每孔加底物A、B各50ul，轻拍混匀，覆上封板膜，置37℃暗置20min。 8.每孔加入终止液50ul。 9.用酶标仪测定。 （三）试验结果
1.阳性对照值应大于阴性对照值0.6以上且阴性对照值小于0.1方可认为本实验有效。
2.Cutoff value=0.1+阴性对照均值（若阴性对照小于0.05以0.05计） 3.样品OD值大于或等于临界值为初筛阳性，小于临界值为阴性。
第三章 结果报告与注意事项
【复检试验】
对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。（具体详见流程图）
【筛试验结果的报告】
对HIV抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告。
对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告。
【初筛试验呈阳性反应样品的转送】
如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV抗体复测送检单”，经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字，与血样品一同送天山区疾控中心实验室，再转送市疾控中心艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。
【操作台消毒处理】
用3~5?消毒液擦拭台面，如工作台被溢出物污染，则用消毒液浸泡30分钟后，再行擦拭。
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【房间消毒】
每日用紫外线照射30~60min
【方法学特性及注意事项】
a) b) c)
试剂盒4~30℃干燥保存。有效期16个月。 抗凝全血应采用EDTA，样品应避免溶血。
样品应在收集后7天内检测，2~8℃保存，如果大于7天，应冷冻保存。 d)
测试卡仅用于HIV抗体的现场初筛，检测阳性必须用ELISA方法进一步确认。 e) f) g)
样本的加样应使用微量加样器准确加入。 实验环境应保持一定湿度、避风，18~25℃进行。
本试剂盒应视为有感染源的物品，应按生物危险样品处理。
【血清加样表】见附件。
每次检测完毕需填写血清加样表，由审核者签字复核，存档，以备查。
第三部分 设备SOP文件
一、多功能自动酶标仪RT-2100C
1． 仪器简介
RT-2100C是一台网络化的酶标免疫测试分析仪器，可广泛用于传染病、肿瘤标志物、血液病、艾滋病、内分泌障碍测定等诊断领域。 2． 仪器原理
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触摸屏 光学及比色系统 信号放大 A/D转换 计算机 LCD显示屏 打印机
3． 环境要求：
1) 避免阳光直晒
2) 温度：10℃~40℃，湿度20%~85% 3) 电源必须接地良好
4) 电源稳定，禁止与大功率用电器共用电源 4． 操作步骤 4．1开机
打开仪器背面的电源开关，等待约10秒钟，开机初始化流程要完成以下工作： 1) 系统程序加载 2) 系统自检 3) 读取用户数据 4) 前端初始化
5) 等待光源稳定：仪器需要等待光源稳定约1分钟左右。 6) 光路自检：期间滤光片轮会转动，酶标板将往返走板一次。 开机结束后，进行主菜单窗口。 4．2项目设置
在主菜单中按[项目设置]键，进入项目列表窗口。 4．2．1新建与更改项目
按[新建]或[更改]键，添加或更改项目，如果项目数已经超过100，将无法创建新项目。按图所示设置参数设置。
1) 项目名称：该项必须输入，注意不要与已经存在的项目名重复。 2) 试剂名称：根据所用试输入，也可以不输入。
3) 波长：从列表中选取，注意主波长和次波长不能重复。 4) 计算方法：从列表中选取
5) 双样本：若选择双样本，则布板时每个样本孔的相邻孔自动设置为重复孔，计算时取两
者吸光度的平均值。
6) 空白上限：职由试剂要求空白必须不超过0.05,则空白应设为<0.05，测试时如果空白孔
吸光度值超过设定的上限，系统会提示用户“空白也吸光度值过高”。 7) 定量计算，根据试剂说明输入：
a) 标准品数量：选择2~8个标准品。 b) 浓度单位：从列表中选择。
c) 双标准：若选择双标准：则布板时每个标准孔的相邻孔被自动设置为重复孔，计算
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