壤悬液液； 2.2.1.3. 涂布[2]：
用无菌移液器从各浓度的土壤稀释液取50 uL于筛选培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂布，充分涂布均匀。每个浓度2个平板，一个空白对照，并将接种完成后的平板置于37℃恒温箱，倒置培养24h； 2.2.1.4. 筛选：
从各个土壤悬液稀释度的涂布平板上挑取直径较大的单菌落，10个，于新的筛选培养基中进行分区划线； 2.2.2. 纯化及复筛 2.2.2.1. 分区划线接种[2]：
用接种环挑取10个较大菌落于筛选培养基中进行分区划线，先在平板的一边作第1次平行划线3～4条，在转动培养皿约60。角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第1次划线部分作第2次平行划线，再用同法通过第2次平行划线部分作第3次平行划线和通过第3次平行划线部分作第4次平行划线。划线结束后，盖上皿盖，倒置在37 ℃下恒温培养24 h。 2.2.2.2. 单染色[2]
涂片、干燥及固定；初染：在涂有菌种的载玻片上滴加适量的草酸铵结晶紫染色液或石炭酸复红液，染1 min，倾去染液，用水冲洗至无染色液颜色为止。镜检：用油镜观察染色结果； 2.2.2.3. 芽孢染色[2]
涂布、干燥及固定；加染色液：于涂片上加入2～3滴5%孔雀绿水溶液；加热：用试管夹夹住载玻片在火焰上用微火加热，边加热边滴加染色液，自载玻片上出现蒸汽时，开始计时，约4 min；脱色：倾去染液，待玻片冷却后，水洗至孔雀绿不再褪色为止；复染：滴加沙黄染色液，染2～3 min，水洗；镜检：用油
镜观察染色结果。 2.2.3. 淀粉水解实验[2]
对通过单染色和芽孢染色的镜检得到的纯培养的芽孢杆菌进行淀粉水解实验，并从中筛选出水解圈较大的6株菌作为目的菌，进行后续实验。具体步骤如下：挑取菌种，采用点解法接种于可溶性淀粉培养基中，每两种菌做一个平板，并做一次平行实验和空白对照组。将接种完成的平板置于37℃恒温箱中倒置培养24h。
2.2.4. 斜面保种[2]：
取各种无菌牛肉膏蛋白胨斜面培养基数支，贴上标有菌株名称和接种日期的标签，每种菌接3管，用接种环挑取单菌落进行斜面接种，加塞，包扎好后在37 ℃下恒温培养24 h，再放入冰箱4℃暂存备用； 2.2.5. 生理生化试验鉴定 2.2.5.1. 革兰氏染色实验[2]
从各纯培养的平板中挑取菌种于载玻片上，滴加无菌生理盐水，涂片、干燥及固定；初染：在涂有菌种的载玻片上滴加适量的草酸铵结晶紫染色液，染1 min，倾去染液，用水冲洗至无染色液颜色为止；媒染：滴加卢戈氏碘液，染1～2 min，水洗；脱色：滴加95%乙醇，将玻片摇晃几下倾去乙醇，重复2～3次，立即水洗；复染：滴加沙黄染色液，染2～3 min，水洗；镜检：用油镜观察染色结果。 2.2.5.2. 糖发酵实验（葡萄糖）[2]
用接种环将各种杆菌分别接种于葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇的发酵管内，每种发酵管重复两次，标记，并设置空白组作为对照（注意接种的整个过程中不能认为的制造气泡），接种完后，每一管外包一层无菌纸，以防污染，将全部发酵管倒置于小烧杯内，37℃培养24h。
观察记录，与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“—”表示，若培养液呈黄色，反应结果为阴
性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“+”表示。培养液的杜氏小管内有气泡为阴性反应，表明该菌分解糖能产酸产气，记录用“+”表示，如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“—”表示。 2.2.5.3. 乙酰甲基甲醇实验（V.P试验）[2]
取葡萄糖蛋白胨培养液的试管，编号，以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养二十四小时，培养完后，取出上述试管充分震荡2min每管分别加入40%NaOH溶液10~20滴，并加ɑ—萘酚，振荡试管以使空气中的氧融入，置37℃温箱中保温15-30min后，若培养基呈红色，记录为V.P试验阳性反应（+）表示，若不呈红色，记录为V.P试验阴性反应（用“-”）表示。 2.2.5.4. 吲哚试验[2]
取装有蛋白胨水培养液的试管编号，以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，并做空白对照，置37℃培养箱中24h，在培养液中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰红色，说明吲哚试验为阳性反应，否则为阴性反应。 2.2.5.5. 耐盐试验[2]
将分离获得的菌种分别接种在2%、5%、7%的高盐培养基中，设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃下培养，观察生长状况，并做记录。记录方式如下：不生长：—，生长差：+，生长一般：++，生长良好：+++； 2.2.5.6. 柠檬酸盐利用试验[2]
取若干装有西蒙斯柠檬酸盐培养基的试管，将菌种接入试管，置于37℃恒温箱中培养24~48h。若培养基为蓝色，则表明能利用柠檬酸盐作为碳源生长，以“+”表示。若培养基为绿色则为阴性，以“—”表示。
2.2.5.7. 明胶试验[5]
挑取菌种，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。于20~22℃培养7~14天。每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时，应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性，以“+”表示。平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，10~20min后，菌落周围应出现清晰带环。否则为阴性。 2.2.5.8. 硝酸盐还原试验[5]
被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养l～4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1 mL）加入培养基内，立即观察结果。
结果：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。若仍不产生红色，表示试验为假阴性。 若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，如有气泡产生，表示有氮气生成。 2.2.5.9. 酪素水解试验[5]
取牛奶平板，将菌种划线接在平板上，每皿1株菌。设置一组对照，一组平
行实验组，并置于37℃恒温箱培养，记录菌落周围和下面酪素是否已被分解而呈透明。
2.2.5.10. 酪氨酸水解[5]
取酪氨酸平板，将测试菌接种于划线接于培养基上，设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃恒温箱培养，记录酪氨酸结晶是否被水解而变透明。 2.2.5.11. 鞭毛穿刺试验[2]
取装有半固体培养基的试管，使用穿刺法接种待测菌，37℃培养24h，观察穿刺线形态，若是会运动的细菌，培养基中的穿刺线呈云雾状，但是如果是需氧
型的话会在培养基表面上形成一薄膜；若是不会运动的细菌，培养基中的穿刺线很清晰。 2.2.5.12. 鉴定[6]
根据从伯杰式细菌学手册芽孢杆菌属中检索到的芽孢杆菌的生理生化特点，选取能从土壤中分离到的芽孢杆菌种为标准菌种，其生理生化指标如下表：
通过对目的菌种进行多项生理生化实验，对比伯杰式手册的实验结果，从而鉴定出目的菌的种别；