2.2.6. 产淀粉酶芽孢杆菌淀粉酶活性的测定（3，5-二硝基水杨酸显色法）[1] 2.2.6.1. 粗酶液制备：
以一环菌种接种于发酵培养基中，摇床培养，160 rpm/min , 37 ℃，48 h。4000 rpm/min离心20 min，收集上清液即为待测粗酶液。 2.2.6.2. 1mg/mL标准麦芽糖的制备：
准确称取100mg麦芽糖，用蒸馏水准确定容到100mL； 2.2.6.3. 3，5-二硝基水杨酸试剂的制备：
准确称取3，5-二硝基水杨酸1g，溶于20mL 2mol/L NaOH溶液中，加入50mL蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后，用蒸馏水定容到100mL，盖紧瓶塞，备用；
2.2.6.4. 0.1mol/L Ph5.6的柠檬酸缓冲液的制备
准确称取4.62g柠檬酸和17.05g柠檬酸钠，用蒸馏水定容至800mL； 2.2.7. 1%淀粉溶液的制备
准确称取1g淀粉于100mL 0.1mol/L Ph5.6的柠檬酸缓冲液中； 2.2.8. 标准曲线的绘制
标准样液配制按上表配制完成，摇匀，置沸水浴中煮沸10 min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20 ml。以一号管作为空白对照管， 520 nm比色测定吸光度。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2.2.9. 测定
取10 ml 具塞刻度试管，预先洁净灭菌干燥、编号。按下表配制溶液，定容后，摇匀，用分光光度计测定OD在520 nm的值。
2.2.10. 计算
根据测到的OD值，在标准曲线中找到相应的麦芽糖量，并在上述条件下以单位体积样品在30 min释放1 mg麦芽糖所需的酶量为一个麦芽糖单位（MMU）酶活力，按下式计算出淀粉酶的活力。
淀粉酶活力=麦芽糖释放量（mg）·6·稀释倍数 3. 结果与分析 3.1. 菌株的初筛
通过90℃水浴20min分别对2分土样进行预处理，杀死无芽孢菌体，再以弱选择性淀粉培养基和稀释涂布平板法对土壤中产淀粉酶芽孢杆菌进行初步筛选，获得12株菌，并分别点接于淀粉平板中，进行淀粉水解测定，最后挑取了3株淀粉水解圈较大的菌株，进行分离纯化。 3.2. 菌株的复筛
分别通过3次分区划线，分离纯化初筛所得到的3株菌，经单染色镜鉴，鉴定为纯培养；经芽孢染色镜鉴，观察到3号菌芽孢端生，1、2号菌芽孢中生，均为
芽孢杆菌；经淀粉水解试验，发现3号菌几乎没有水解圈，1、2号菌有水解圈。采用斜面包藏法保存1、2号菌株于斜面试管中，置于冰箱保种。
图1 淀粉水解试验 图2 1号纯培养
图3 1号单染色 图4 2号单染色
3.3. 菌株的鉴定
通过革兰氏染色、运动性试验、耐盐试验、温度试验、柠檬酸盐试验、硝酸盐还原试验、酪氨酸水解试验、酪素水解试验、糖发酵试验、VP试验、吲哚试验、明胶水解试验等生理生化实验，对筛选得到的菌种进行鉴定。
各项生理生化实验结果如下表：
按照伯杰式细菌学手册的检索样式，对实验原始数据进行整理，整理结果如下：
对照伯杰式细菌学手册，与芽孢杆菌属，蜂房芽孢杆菌的各项生理生化指标完全吻合，且1、2号菌生理生化鉴定结果相同。综上所述，鉴定结果为：1、2号菌均为蜂房芽孢杆菌。 3.4. 淀粉酶活力的测定 3.4.1. 麦芽糖标准曲线
公式：Y=0.2915X；R2=0.9943 3.4.2. 淀粉酶活力