2015-2016生物药物分离纯化技术实验指导 - 图文(4)

2020-04-17 07:11

在该柱层析分离色素实验中,我了解了柱层析技术的相应方法和原理,学会了层析柱的制作和准备,进一步了解绿叶中色素的组成及各色素的颜色和性质、洗脱液的配比、层析柱的制作及洗脱液的流速是本实验成功与否的三大关键因素。

知识拓展:

1、溶剂的选择:

(1)吸附剂要求较纯,否则会影响样品的吸附和洗脱。 (2)溶剂和吸附剂不能起化学反应。

(3)溶剂的极性应比样品小,如果大了,样品不宜被吸附剂吸附。

(4)溶剂对样品的溶解度不能太大,否则影响吸附,但也不能太小,溶液的体积增加,易使色谱分散。

(5)可使用混合溶剂,如有的组分含有较多的极性基团,在极性小的溶剂中溶

解度太小。也可选用极性大的溶剂溶解,然后加入一定量的非极性溶剂。这样既降低了极性,又减少了溶液的体积。

2、洗脱剂的选择:

样品吸附在氧化铝柱上后,用合适的溶剂进行洗脱,这种溶剂称为洗脱剂。如果原来用于溶解样品的溶剂冲洗柱不能达到分离的目的,可以改用其他溶剂,一般极性较强的溶剂影响样品和氧化铝之间的吸附,容易将样品洗脱下来,达不到分离的目的。

因此常用一系列极性渐次增强的溶剂,既先使用极性最弱的溶剂,然后加入不同比例的极性溶剂配成洗脱溶剂。常用的洗脱溶剂的极性按如下次序递增。 己烷和石油醚<环己烷<四氯化碳<三氯乙烯<二硫化碳<甲苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<乙酸。

实验十一 活性炭吸附分离色素实验

一、实验目的

(1)了解吸附的基本原理;

(2)掌握活性炭、木炭的静态和动态吸附的基本操作技术。 二、实验原理

活性炭具有较大的比表面,在水溶液中比一般固态物质吸附能力强很多,故可以吸附许多物质的分子及离子,本实验用活性炭、木炭静态和动态吸附溶液中的色素。 三、实验仪器

离心机、大烧杯(≥500ml)、烧杯(250ml)、高精度pH试纸、大容量瓶、移液管、玻璃棒等。 四、材料和试剂 1.材料

胡萝卜或红心萝卜8kg、活性炭粉8kg、脱脂棉1包。 2.试剂

(1)石蕊试剂500ml、浓硝酸500ml高锰酸钾400g;‘

(2)组织捣碎机、烧杯、U形管、漏斗、直通管、导管、漏斗架、胶塞、玻璃管、橡皮圈等。

四、实验步骤

注意事项:

(1)、活性炭使用前一定要经过处理,增强他的吸附活性,实验前要将木炭或活性炭放在坩埚里烘烤,充分进行解吸。

(2)、选用有色液体不要太浓,否则吸附不干净可能会出现色带,得不到无色清液

(3)、榨取的胡萝卜汁在活性炭脱色前,应进行过滤前处理,避免汁液过黏影响吸附效果。 (4)、所用锥形瓶在实验前应该是干燥的。 六、结论 七、思考

1、木炭和活性炭那种吸附剂的吸附效果好?

2、实验中第一步和第二步用同样的胡萝卜色素和活性炭,哪步吸附效果显著?

实验十二 卵磷脂制备

实验十三银耳多糖的制备及鉴定和含量测定


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