【思考题】
1.怎样从黄柏中提取分离盐酸小檗碱？原理是什么？为什么加石灰乳？ 2.通过从黄柏中提取盐酸小檗碱，试述药材粉碎度等对提取的影响。
3.用薄层色谱法检识盐酸小檗碱时，选用氧化铝或硅胶作吸附剂，二者有何区别？展开剂有何不同？
实验二 槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离与鉴别
【实验目的】
1.掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 2.掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。 3.熟悉和了解采收与炮制对芦丁含量的影响。
【实验原理】
1.槐花为豆科植物槐Sophora japonica L．的干燥花及花莆。前者习称槐花Flos Sphorae；后者习称槐米Flos Sophorae Immaturus。主产于河北、山东、河南、陕西、江苏、广东、广西、辽宁等地。以河北、山东、河南产量大。 性能：苦，性微寒。功效：凉血止血、清肝泻火 。应用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。
2.主要含有芦丁（芸香苷）、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、粘液质等。近代研究表明槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用作高血压辅助治疗剂。芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。
3.芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶，含3分子结晶水（C27H30O16·3H2O），加热至185℃以上熔融并开始分解。芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇中1:60，沸甲醇中1:7，可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
【实验仪器与试剂】
1.1000、500、100、10ml烧杯，10ml试管，试管架，托盘天平，量筒，三角漏斗，洗瓶，布氏漏斗，电炉，10×20cm薄层板，10×20cm薄层色谱缸，色谱专用滤纸，聚酰胺色谱膜，点样毛细管，紫外灯（仪），玻棒，牛骨匙，纱布，脱脂棉，显色剂喷瓶，小型空压机。
2.槐花米粗粉，滤纸，pH试纸，生石灰，硼砂，2%硫酸，浓硫酸，稀盐酸，浓盐酸，10%氢氧化钠，乙醇，10%α-萘酚乙醇溶液，镁粉，1%醋酸镁甲醇溶液，1%三氯化铝乙醇溶液，2%二氯氧锆甲醇溶液，2%枸橼酸甲醇溶液，Ba(OH)2，滑石粉，甲醇，氨水，芸香苷、槲皮素、葡萄糖、鼠李糖对照品，展开剂：正丁醇-乙酸-水（4:1:5）上层溶液（纸色谱），90%乙醇或乙醇-水（7:3）（聚酰胺色谱），显色：苯胺-邻苯二甲酸盐试剂。
【实验步骤】
1.芸香苷的提取 称取50g槐花米粗粉，于500mL烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液300mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH8～9，加热微沸30min，注意添加水，随时补充蒸发掉的水分保持原体积并维持pH8～9，趁热用脱脂棉过滤；药渣同样操作再提取一次，合并滤液，稍冷，用浓盐酸调至pH4～5，静置过夜使沉淀完全，抽滤，用蒸馏水洗3～4次，抽干置空气中自然干燥得淡黄色粗制芸香苷。
2.芸香苷的精制 将芸香苷粗品置500mL烧杯中，加适量（约100mL）蒸馏水，再用石灰水调至pH8。加热煮沸数分钟，使充分溶解。趁热抽滤，滤液滴加3mol/LHCl调至pH7，放置18h以上，即析出沉淀。减压过滤，用少量蒸馏水洗涤沉淀2～3次。抽干，于70～80℃干燥1h，即得精制芦丁。称重，计算产率。
3.芸香苷的水解 取精制芦丁2g，研细，置于500mL圆底烧瓶中，加2%硫酸溶液150mL，于直火回流30min，放置至室温，析出黄色槲皮素结晶，抽滤，滤液保留作糖部分的鉴定。沉淀水洗后再用95%乙醇重结晶一次，得黄色针状结晶，于70～80℃以下干燥，即得精制槲皮素。
4.检识
（1）取芸香苷、槲皮素少许，分别用10mL乙醇溶解，制成试样溶液，照以下方法进行实验。
①Molish反应：取试样溶液各2mL，分置于两支试管中，加10%α-萘酚乙醇溶液1mL，振摇后倾斜试管45°，沿管壁滴加2mL浓硫酸，静置，观察两液面交界处颜色变化（棕色环）。
②盐酸-镁粉反应：取试样溶液各2mL，分别置于两支试管中，各加入镁粉少许，再加入浓盐酸数滴，观察并记录颜色变化。
③醋酸镁反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1%醋酸镁甲醇溶液2滴，于紫外灯下观察荧光变化，并记录。
④三氯化铝反应：取两张滤纸条，分别滴加试样溶液后，加1%三氯化铝乙醇溶液2滴，
于紫外灯下观察荧光变化，并记录。
⑤锆-枸橼酸反应：取试样溶液各2mL，分别置于两支试管中，各加2%二氯氧锆甲醇溶液3～4滴，观察颜色，然后加入2%枸橼酸甲醇溶液3～4滴，观察并记录颜色变化。
（2）糖的纸色谱鉴定 取水解母液20mL，用Ba(OH)2的细粉（约2.6g）中和至pH7，滤去生成的BaSO4沉淀（可用滑石粉助滤），滤液浓缩至约1mL，供纸色谱点样用。
样品：水解浓缩液 色谱滤纸：新华滤纸
对照品：葡萄糖、鼠李糖水溶液
展开剂：正丁醇-乙酸-水（4:1:5）上层溶液。
显色：苯胺-邻苯二甲酸盐试剂，喷后105℃烘10min，显棕红色斑点。苯胺-邻苯二甲酸的配制：将1.66g苯二甲酸和0.93g的苯胺溶于100mL水饱和的正丁醇中。
（3）芦丁、槲皮素的纸色谱和聚酰胺薄层色谱鉴定 样品：自制芦丁、槲皮素的乙醇液 色谱材料：新华滤纸，聚酰胺薄膜 对照品：芦丁、槲皮素的乙醇溶液
展开剂： 正丁醇-乙酸-水（4:1:5）上层溶液（纸色谱）。90%乙醇或乙醇-水（7:3）（聚酰胺色谱）。
显色：
①可见光下观察及紫外灯下观察。 ②喷三氯化铝试剂后再观察。
【基本操作注意事项】
1.加入石灰乳即可达到碱溶解提取芸香苷目的，又能使槐米中含存的大量粘液质生成钙盐沉淀除去，但应严格控制在pH8～9，不得超过10。pH过高，在加热提取过程中可促使芸香苷水解破坏，造成产率明显下降。酸沉时加浓硫酸调pH3～4，不宜过低，否则会使芸香苷生成盐溶于水，也会降低收率。
2.加入硼砂的目的是使其与芸香苷邻二酚羟基结合，这样既保护邻二酚羟基不被氧化破坏，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芸香苷不受损失。同时还有调节碱性水溶液PH值的作用。
3.芸香苷的提取还可以利用芸香苷在冷、热水中的溶解度不同，采用沸水提取法。
【思考题】
1.苷类水解有几种催化方法？
2.试解释芸香苷水解过程中出现的混浊→澄清→混浊现象。 3.怎样正确鉴定芸香苷？
4.本实验提取过程中应注意哪些问题？