诊疗技术 李勇生 (一)血样的抗凝 除需分离血清外，自静脉或心脏采出的血液均应加入抗凝剂，以防血样凝固。临床常用的抗凝剂除肝素(具有抗凝血酶的作用)外，多数是以脱钙作用而使血液不能凝固。常用的抗凝剂有下列几种。
1.双草酸盐合剂。草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，蒸馏水100ml。取此掖0.5ml(分装于小瓶中，在60℃以下的烘箱中烘干)，可使5ml血液不凝固。由于草酸钟使红细胞皱缩，草酸铵则使红细胞膨胀，二者按比例混合，可使红细胞大小不致改变，适用于血液检验尤其是红细胞压积容量测定。但由于其具有一定毒性并可使血小板聚集，因此不宜作输血及血小板计数的抗凝剂。
2.乙二胺四乙酸二钠(简称EDTA二钠)。常用10％水溶液，按每5m1血液加入一至二滴使用，也可以将其水溶液二滴置小瓶中，在60℃以下烘干备用。此剂抗凝作用强，能保持血细胞的形态，可防止血小板聚集，最适于血液学尤其是血液有形成分的检验。但输血时不能用。
3．柠檬酸钠。配成3．8％溶液，每0．5ml可使5m1血液不凝固，主要用于输血和血沉测定。不适用于血液化学检验。
4．肝素。配成1％水溶液放冰箱内保存，用0。lml可抗凝5m1血液，用此液湿润注射器筒，采血5mlBp可不致凝固。此剂抗凝作用强，适用于血液有机和无机成分的分析，缺点是价格贵，抗凝时间短，其抗凝血作白细胞分类计数时，血细胞着色不佳。 (二)血样的处理 血涂片应先预以固定。如果要分离血浆，可把抗凝血以2000—3000r／min离心5—lOmin~或在室温下静置沉淀，上层液体即为血浆。需要分离血清时，将装有凝固血样(未加抗凝剂)的试管放室温或37℃水浴0.5h，用竹签将血凝块从管壁慢慢剥离并继续保温，促使血清析出，再经电动离心后，尽快把血清分离到另外的试管中，一般不要迟于血凝后45min，以减少细胞内、外成分的变动。
血样最好立即进行检验，否则，必须密封后放入冰箱内保存。用抗凝血作有关化验项目的最长保存时限。白细胞计数是2—3h，红细胞计数是24h；红细胞压积容量测定是24h；血红蛋白测定是2—3天，血沉测定是2—3h，血小板计数约1h；网织红细胞计数是2—3h。
第二节 血常规检验
一、红细胞沉降速度测定
血液加入抗凝剂后，吸入特制的测定管中，在一定时间内红细胞下沉的毫米数，称为红细胞沉降速度(Erythrocyte sedilTIOlltation rate，ESR)，简称血沉。
(一)原理 抗凝血中的红细胞沉降速度的快慢，是一个复杂的物理化学和胶体化学过程，其原理至今仍未完全阐明。一般认为，与血中电荷的含量有关。红细胞与血浆白蛋白带负电荷，而血浆球蛋白、纤维蛋白原和胆固醇却带正电荷，在正常时保持着正、负电荷相对的稳定性，红细胞不易形成串钱状，其沉降速度在正常范围内。在疾病过程中，上、述任何一方的数目或含量改变，直接影响正负电荷相对稳定性。假如正电荷增
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诊疗技术 李勇生 多，则负电荷相对减少，红细胞互相吸附，形成串钱状而血沉加快；反之，红细月6、互相排斥，则血沉变慢。
此外，认为与红细胞的下沉力和血浆的阻逆力之间是否保持一定的平衡状态有关。 (二)测定方法 测定血沉的方法很多，有六五型血沉管法、魏氏法、潘氏法、温氏法、微量法等。我国兽医临床上主要应用前二种方法。
1．六五型血沉管法。适用于马、骡、驴血沉的测定。六五型血沉管内径为0．9cm，全长17—20cm，管壁有100个刻度，自上而下标有0—100，容量为10ml。另一侧自下而上标有20—125刻度，用于换算血红蛋白含量。
测定时，于血沉管内加入10％EDTA二钠4滴(或草酸钾粉末0．02—0．04g)，由颈静脉采血，加入血沉管至刻度“o”处，用胶皮塞或拇指堵住管口，轻轻颠倒血沉管8—10次，使血液与抗凝剂充分混合后，在室温下垂直立于试管架上，经15、30、45、60min各观察一次，分别记录血沉管上红细胞柱高度的刻度数值，即为各段时间的血沉值。
2．魏(Westergren)氏法。魏氏血沉管全长30cm，内径2．5mm，管壁有200个刻度，每一刻度距离为lmm，自上而下标有0—200，其容量为lml，附有特制的血沉架。 操作时，先取3.8％柠檬酸钠溶液lml，加入小试管内，然后静脉采血4m1，混匀。用魏氏管吸此抗凝血至“o”刻度处，然后在室温下：浴血沉管垂直放于血沉架上，其观察时间与上法相同。也可用5ml注射器吸取灭菌的3．8％柠檬酸钠溶液lml，再采血4m1，混匀后，从魏氏管下部将抗凝血注至“o”刻度处，立于血沉架上，进行观察。 (三)注意事项 血沉管必须垂直静立，否则会使血沉加快。但由于黄牛、奶牛、羊的血沉极为缀慢，为尽快测出结果，可将血沉架倾斜60‘角放置。
温度高低，能影响血沉速度。温度越高，血沉越快，反之，可使其减慢，故血沉测定以室温20~C左右为宜。冷藏的血液，应先把血温回升至室温后再做检查。 采血后应在3h内测完，如放置时间延长，可使血沉减慢。魏氏法中血液与抗凝剂的比例为4：1，应准确，如比例增加，血沉减慢，反之则血沉加快。
(四)正常参考值 各种方法测得的血沉值不同，故在报告测定结果时应注明所用方法。家畜的血沉正常参考值见表9—1。
(五)临床意义 血沉测定是一项非特异性的试验，仅能说明体内存在病理过程，并不能单独据此来确诊疾病。如前所述，影响血沉的因素，主要是红细胞数和血浆蛋白质的含量和组成，因此，其临床意义主要涉及以下方面。
表9—1 家畜的血沉正常参考值 动物种类 马 血沉值（单位：mm） 15min 30min 45min 60min 31.0 49.0 53.0 55.0 测定方法 六五型法 测定来源 中国人民解放军兽医大学 22
诊疗技术 李勇生 马 骡 驴 黄牛 奶牛 水牛 山羊 猪 20.7 23.0 32.0 0.15 0.3 9.8 0 3.8 70.7 47.0 75.0 0.63 0.7 30.8 0.5 8.4 95.0 52.0 96.7 1.1 0.75 65.0 1.6 20.0 115.0 54.0 110.0 1.4 1.2 91.6 4.2 30.0 魏氏法 六五型法 魏氏法 魏氏法 魏氏法 魏氏法 魏氏法，倾斜600 魏氏法 中国农科院中兽医研究所 中国人民解放军兽大学 甘肃农业大学 云南农业大学 甘肃农业大学 江苏农学院 西北农业大学 甘肃农业大学 1.血沉加快。常见于各种贫血及白血病时(由于红细胞数减少，血沉加快)，目前仍把它作为普检马传染性贫血的重要指标之一；亦见于急性全身性感染、各种炎症、组织损伤及坏死时(由于血浆球蛋白或纤维蛋白原相对或绝对增高，均可使血沉加快)，恶性肿瘤（由于上述二方面的原因），而使血沉加快。
2.血沉减慢。主要见于各种原因所致的脱水而血液浓缩时，以及某些弓I起纤维蛋白原含量严重减低的肝脏疾患。
二、血红蛋白含量测定
血红蛋白(Hemoglobin，简称Hb)测定方法很多，最常用的是沙利(S9hU)氏目视比色法，虽然精确度有一定误差，但方法简便快速，目前仍被兽医临床广泛应用。 (一)原理 红细胞遇酸溶解，释出血红蛋白，并被酸化成褐色的酸性血红素；稀释后与标准色柱比色，即可测定每100m1血液中血红蛋白的克数或百分数。 (二)器械和试剂
1.器械。沙利氏血红蛋白计一套(内有测定管一支，装有标准褐色玻璃比色板的比色座一个，刻有10mm3和20mm3容积的吸血管一支)，在测定管上有两种刻度，从下往上，一侧有2—24的刻度，表示
100ml冉液中所含血红蛋白克数，另一侧有20—160的刻度，表示100ml血液中血红蛋白的百分数。国产的血红蛋白计是以每100m1血液含14.5g血红蛋白为100％而设制。 2.试剂。1/10m01/L盐酸(亦可用1％盐酸代替)。取浓盐酸8．5m1于1000ml容量瓶中，然后加蒸馏水至刻度。
(三)方法 于测定管内加l/10m01/L盐酸至刻度“2”处。
用吸血管吸抗凝血(或耳尖血)至刻度20mm*处，擦净管外壁的血迹，将血液吹入测定管的盐酸液中，再吸取上清的盐酸液至刻度处反复洗涤数次，轻轻摇动测定管(或用玻棒搅拌)，使血液与盐酸混合， 静置10min。
慢慢沿测定管壁逐滴加入蒸馏水(或1／lOmol／L盐酸)，边加边混匀，边观察，直至液体颜色与标准色柱一致时为止。
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诊疗技术 李勇生 读取测定管内液体凹面的刻度数，即为100m1血液中血红蛋白的克数或百分数。 (四)注意事项 要注意保持血红蛋白计原套用具，不要随意掉换。抗凝血要摇匀，吸血要准。不要向测定管中用力吹吸，以防产生气泡，万一产生了气泡，可用小玻棒沾少量95%酒精，然后接触气泡，即可消除。静置时间以10min为准，杏则结果可能偏高或偏低。为使结果更为准确，在读数后再加蒸恤水1滴，然后读数，如液体色泽变淡，以前一次的读数为准，如液体色泽不变淡，则以后一次的读数为 准。
(五)正常参考值 一般家畜的正常值见表9—2。
表9—2 家畜血红蛋白正常参考值
动物 平均值 资料来源 中国人民解放军马 骡 驴 黄牛 奶牛 127.7 127.4 109.9 95.5 129.0 20.5 21.8 30.2 10.0 22.8 兽医大学 中国人民解放军兽医大学 甘肃农业大学 延边农学院 江苏农学院 (六)临床意义 与红细胞计数的临床意义相一致。
水牛 奶山羊 绵羊 猪 120.0 78.2 118.0 116.0 4.9 4.5 8.7 9.9 江苏农学院 西北农业大学 内蒙古农牧学院 河北农业大学 动物 平均值标准差 资料来源 24