【关键词】 独一味; 高效液相色谱; 环烯醚萜苷
独一味Lamiophlomis rotata(Benth.) Kudo为唇形科植物，以全草或根及根茎入药，是藏、蒙、纳西族等少数民族常用草药，生长于海拔3 000 m以上的石质高山草甸、河滩地，分布于甘肃、青海、西藏、四川等藏区，具有止血、镇痛消肿、活血化瘀、续筋接骨等功效[1]。以独一味开发出的国家新药独一味胶囊临床用于治疗骨外伤、术后疼痛、妇科疾病等取得了满意的疗效。《中国药典》[2](2005年版Ⅰ部)仅收载木犀草素做对照，以HPLC测定了独一味及胶囊中的含量[3]，而研究表明独一味总环烯醚萜苷类成分具有很好的止血、 促凝血作用，是其中的止血活性成分[4，5]。为了更有效地控制独一味的质量，本实验采用高效液相色谱梯度洗脱法同时测定了四种环烯醚萜苷成分的含量，以确保产品质量。本实验建立的测定方法准确可靠，重复性好，灵敏度高。
1 仪器与材料
Waters1525高效液相液谱仪，2996PDA检测器，717SAMPLER自动进样器，MILLIQ纯水机，B?CHI旋转蒸发仪，Sartorius CP224S电子天平 Max 220 g，d 0.1 mg。
独一味药材[药材市场购买，由刘毅副教授鉴定为唇形科植物独一味Lamiophlomis rotata (Benth.)Kudo.的干燥根];对照品Sesamoside(纯度99.87%)，Shanzhiside methylester(纯度99.01%)，7,8-dehydropenstemoside(纯度98.25%)，8-O-acetylshanzhiside methyl ester(纯度98.63%)均为本实验自制，核磁共振检测;甲醇为色谱纯 (Scharlau chemie S.A.)，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：Waters Symmetry柱(3.5 μm，3.5 mm×100 mm)，柱温：25℃，流动相为甲醇-水梯度洗脱(0～8 min，12%～15%;8～11 min，15%～27%;11～15 min，27%;15～18 min，27%～40%;18～25 min，40%～48%;25～27 min，60%甲醇)，流速1.0 ml/min，检测波长235 nm。
2.2 系统适应性及专属性实验分别取对照品溶液、供试品溶液各5μl进样，记录色谱图见图1～2。在上述色谱条件下Sesamoside出峰时间为3.527 min，Shanzhiside methylester 出峰时间为6.605 min，7,8-dehydropenstemoside出峰时间为14.459 min，8-O-acetylshanzhiside methyl ester出峰时间为19.775 min。供试品在相应位置有显著峰。以Shanzhiside methylester计，理论塔板数>1 500，两峰的分离度≥1.5。实验结果表明该方法能使独一味环烯醚萜苷较好分离，色谱系统的适应性及专属性良好。
图1 对照品的HPLC图谱
图2 独一味药材的HPLC图谱
2.3 标准曲线的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的Sesamoside、Shanzhiside methylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhiside methyl ester对照品，加甲醇制成每毫升含Sesamoside 0.472mg，Shanzhiside methylester 0.880mg，7,8-dehydro- penstemoside 0.188mg，8-O-acetylshanzhiside methyl ester1.50 mg的混合标准溶液。