精密量取上述对照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分别置于6个5.0 ml量瓶里，甲醇定容，即得对照品溶 液。分别进样5 μl，以峰面积为纵坐标，以进样量为横纵坐标进行线性回归，得各成分回归方程见表1。表1 4种成分的回归方程
methyl esterY=-7.37×104+1.41×106X0.999 60.750～3.75
2.4 供试品溶液的制备独一味药材研细，过60目筛，精密称取细粉0.5g，置25 ml具塞锥形瓶中，加70%甲醇25 ml，称定重量，超声20 min，冷却，用甲醇补充重量，过滤，精密吸取续滤液1.0 ml，至5 ml容量瓶中，70%甲醇定容，摇匀;用0.22 μm微孔滤膜滤过即得。
2.5 仪器精密度实验取供试品溶液，连续进样6次，10 μl/次，记录峰面积，结果Sesamoside、Shanzhiside methylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetyl- shanzhiside methyl ester峰面积的RSD分别为1.53%，3.25%，2.76%，1.97%，表示精密度良好。
2.6 稳定性实验取供试品溶液于0，2，4，6，8，10 h进样分析，每次10 μl，记录峰面积，结果Sesamoside、Shanzhiside methylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhiside methyl ester峰面积的RSD分别为3.61%，1.20%，2.01%，3.37%。结果表明供试品溶液中Sesamoside、Shanzhiside methylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhiside methyl ester在10h内稳定。
2.7 重复性实验取同一批独一味，按照“2.4”项下方法制备6份样品液，分别测定峰面积，结果Sesamoside、Shanzhiside methylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhiside methyl ester的RSD分别为2.75%，3.86%，3.24%，2.66%。
2.8 加样回收率实验精密吸取已知含量的独一味样品，6份，分别精密加入Sesamoside、Shanzhiside methylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhi- side methyl ester混合对照品溶液适量，按照“2.4”项下方法制备样品液，进样10 μl测定峰面积，结果Sesamoside、Shanzhiside methylester、7,8-dehydropenstemoside、8-O-acetylshanzhiside methyl ester的平均回收率分别为96.75%，103.21%，103.77%，99.85%，RSD分别为2.86%，3.68%，2.77%，1.55%。
2.9 样品含量测定 取独一味样品，按上述“2.4”方法制备样品溶液，分别精密吸取10 μl供试品溶液， 注入液相色谱仪， 测定峰面积积分值，用外标法测定样品中环烯醚萜苷的含量。3批药材的测定结果见表2。表2 独一味中Sesamoside, Shanzhiside methylester，7，8-Dehydropenstemoside, 8-O-Acetylshanzhiside methyl ester的测定结果
3 结论
研究表明独一味总环烯醚萜苷类成分具有很好的止血、 促凝血作用，是其中的止血活性成分[3]，本研究采用RP-HPLC法对独一味药材中的Sesamoside，Shanzhiside methylester，7,8-Dehydropenstemoside，8-O-Acetylshanzhiside methyl ester 4个环烯醚萜苷进行定量测定，对独一味药材具有更切实际的指导意义。
试验时考察了乙腈-水、乙腈-0.4%磷酸水、 甲醇-水、 甲醇-0.4%磷酸水 4种流动相，并尝试了这4种流动相的多种线性梯度洗脱，结果表明甲醇-水系统最佳，并进行了梯度洗脱条件的优化。采用该系统各个色谱峰的峰形和分离度都较好，基线稳定。因此选用该系统为独一味药材含量测定的流动相。
此方法准确可靠，重复性好，结果稳定，可作为该药材质量控制的方法。
【参考文献】
[1] 张 凤，孙连娜，陈万生.独一味的化学成分及药理作用[J].药学实践杂志，2008，26(3)：169.
[2] 国家药典委员会.中国药典[S].北京：化学出版社，2005：184.
[3] 贾正平，李茂星，张汝学，等.独一味止血有效部位的实验研究[J].解放军药学学报，2005，21(4)：272.