2.3.1 色谱柱及高效液相色谱仪考察 取“2.2.2”项下混合对照品溶液，进样2, 5, 10, 15, 20μl，测定，按“2.2.5”项下计算SSa对SSc和SSd的校正因子。
实验考察了Waters 600, Waters 2690两种高效液相色谱系统和Venusi ASB-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm), Venusi MP-C18(4.6 mm×250 mm, 5μm)，Hibar RT-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm) 3种色谱柱。结果见表4。表4 不同仪器和不同色谱柱测得的相对校正因子
2.3.2 实验室考察采用建立的一测多评分析方法在两个实验室进行复核实验，结果表明两个实验室实验结果差异不大。见表5。表5 不同实验室测得的相对校正因子
2.4 统计学方法 采用统计学t检验，对一测多评法与常规法得到的柴胡药材SSc和SSd含量进行比较，P>0.05，表明两种方法测得含量没有显著性差异。
3 讨论
本实验通过方法学验证、方法耐用性、系统适应性考察，对一测多评法用于柴胡药材3种皂苷含量测定的技术适用性和应用可行性进行了探讨。结果表明在不同色谱柱、不同仪器及不同实验条件下，柴胡皂苷a与柴胡皂苷c和柴胡皂苷d之间的相对校正因子(RCF)有较好的重现性(RSD分别为0.70%和0.56%)。用一测多评法计算的含量与常规的外标法测得的含量经统计学t-检验没有显著性差异，说明本研究所得的SSa对SSc与SSd的校正因子具有普适性。在本研究的色谱条件下，柴胡药材HPLC色谱图中色谱峰比较简单，可以通过SSa与SSc和SS d之间的相对保留时间差进行色谱峰定位，因此在定量柴胡皂苷a、c、d含量时，只要有柴胡皂苷a一个对照品，即可通过该方法实现3种成分同步含量测定。本实验所得的相对保留时间差RTSSa-RTSSc和RTSSa-RTSSd的平均值分别为3.7185和-5.9955 min，校正因子f SSa/SSc和f SSa/SSd的平均值分别为0.742和0.945，可供参考和使用。
中药化学成分非常复杂，在不同色谱条件下有不同的色谱峰，在同一色谱条件下，其色谱峰的数量、出峰时间及峰形等也受色谱柱、仪器及溶剂系统等多种因素影响，因此如何将待测色谱峰准确定位，是“一测多评”方法能否成功应用的关健问题，需要进行深入广泛的研究。对于在一定色谱条件下，色谱峰相对较少的中药，可根据《中药注射剂色谱指纹图谱研究的技术要求(暂行)》[7]推荐使用相对色谱保留时间作为定性依据，根据内标峰的保留时间，加上相对保留时间差，再根据峰形，即能够正确判断出目标峰的峰位置。本实验采用这种方法，效果良好。对于同一色谱条件下，色谱峰较复杂的中药或复方制剂，可采用光谱相关色谱法进行色谱峰的定位，同一组分在不同色谱柱及色谱仪器中的保留时间存在差异，但他们的光谱(或质谱)相同或相似。王亚丽等[8]应用光谱相关色谱法实现了当归补血汤与其单味药中各组分的归属。当然，最好是使用少量的对照品对待测峰进行定性和准确定位后，采用相对校正因子计算含量是比较准确的。
一测多评法用于中药多指标质量评价与控制才刚刚开始，相对较正因子在同结构类型、不同结构类型化合物及不同色谱条件之间的普适性如何以及待测色谱峰的定位等问题还需要深入的研究。尽管如此，该方法为中药多指标质量评价和控制提供新的研究思路和方法。
【参考文献】
[1] 王智民，高慧敏，付雪涛，等.“一测多评”法中药质量评价模式方法学研究[J].中国中药杂志, 2006, 31(23): 1925.
[2] 朱晶晶，王智民， 匡艳辉，等.一测多评法同步测定人参和三七药材中多种人参皂苷的含量[J].药学学报，2008，43(12)：1211.
[3] 谢东浩，蔡宝昌，安益强，等. 柴胡皂苷类化学成分及药理作用研究进展[J]. 南京中医药大学学报,2007,23(1):63.
[4] 林东昊，茅仁刚，王智华，等. 23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d含量的RP-HPLC测定[J].药物分析杂志，2004，24(5)：479.