1.2.6 荧光蛋白的高效毛细管电泳检测
分别取纯化后的His-EGFP和His-EGFP-CRP的蛋白样品，用PBS将浓度稀释为100 mmol/L，按操作说明加入到毛细管电泳仪PA800的专用样品管内以备进样检测；检测器选用激光诱导荧光（laser induced fluorescence, LIF）模组，检测波长为488 nm；毛细管柱为N-CHO内涂层的石英毛细管，内径50 μm，总长度为50.2 cm，从进样端至检测窗口的长度为40 cm；采用真空抽吸进样，压力为2 psi，进样时间10 s，电泳电压为20 kV，进样端设置为正极，检测端为负极。分别使用pH值为7.0、6.0、5.0、4.0、3.0的电泳缓冲液（0.1% Tween 20，100 mmol/L 四硼酸纳）对上述2种样品进行分离检测。
1.2.7 细胞培养及His-EGFP-CRP结合活性检测
THP-1用含10% FBS的RPMI-1640在CO2培养箱（37℃，5％CO2）中培养。细胞培养至1×1010个/L时，取5 ml细胞培养物于25 ℃ 1 000 r/min离心5 min，弃上清，用细胞裂解液（10%甘油、50 mmol/L Hepes-KOH、100 mmol/L KCl、0.1% NP-40、2 mmol/L DTT、10 mmol/L NaF、0.25 mmol/L NaOVO3、50 mmol/L β-甘油磷酸）1 ml、10 μl protease inhibitor cocktail重悬沉淀，4 ℃静置1 h后，4 ℃ 14 000 r/min离心20 min。离心上清中分别加入His-EGFP和His-EGFP-CRP的蛋白样品（终浓度为100 mmol/L），混匀后于37 ℃静置30 min，加入的样品管中，按上述参数进行高效毛细管电泳检测。
2 结果
2.1 pET14b/MCS-EGFP和pET14b/EGFP-hCRP的原核表达及其蛋白纯化
如图1A所示，与未转化质粒的BL21（DE3）相比较，转化了pET14b/MCS-EGFP的感受态细菌经IPTG于室温诱导后，在约30 kD分子量处出现了一条特异性条带，与His-EGFP的理论分子量（约29 kD）接近，表明诱导表达成功；菌液经超声裂解后，离心得到的沉淀和上清中均检测到高丰度的His-EGFP蛋白，说明His-EGFP的可溶性很好，但由于表达量很高，部分蛋白也可能在形成的包涵体内。经过金属Ni离子亲和色谱法纯化后，结果显示获得的目的蛋白纯度和回收率均很高。
如图1B所示，pET14b/EGFP-hCRP转染感受态BL21（DE3）并诱导后，在约50 kD处出现1条表达量不是很高的特异性条带，与His-EGFP-CRP的理论分子量值接近，说明诱导表达成功；菌液经超声裂解后，沉淀中可检测到大量的His-EGFP-CRP蛋白，而上清中几乎检测不到相应的条带，提示原核中表达的His-EGFP-CRP溶解性很差，基本以包涵体的形式存在。包涵体经过洗涤、溶解后释放出His-EGFP-CRP，经亲和色谱法纯化，得到纯度较高的目的蛋白，回收率低于His-EGFP的纯化。
2.2 His-EGFP和His-EGFP-CRP样品HPCE检测
如图2A和2B，当电泳缓冲液pH为7和6时，His-EGFP和His-EGFP-CRP的分离检测效果很差，几乎没有荧光信号被检测到；当pH值小于或等于5时，可以检测到波长为488 nm的绿色荧光信号，随电泳缓冲液pH逐渐减小，信号峰的峰宽也逐渐减小，峰高增加。His-EGFP的检测为单峰，提示His-EGFP的结构形式较为单一；而对于His-EGFP-CRP，pH值为5时，可检测到2个峰，分辨率较低；pH值为4和3时，可检测到3个峰，说明该蛋白的结构形式有多样性。
2.3 His-EGFP-CRP结合活性检测
对加入了His-EGFP的细胞裂解物进行HPCE，除了在5～9 min处有一些微小峰外，其分离图谱与单纯的His-EGFP样品检测没有明显差异（见图2A和图2C）。相对于单纯His-EGFP-CRP样品检测，加入了His-EGFP-CRP的THP-1裂解物的分离图谱出现了明显的改变，3～7 min处峰群的峰高和峰面积明显减少，在8～13 min处出现了新的峰群，以电泳液pH为4时最为明显（见图2B和2D）， 提示His-EGFP-CRP与某些细胞分子结合成为复合物，从而使其延迟时间发生了改变。