Research Articles
基础研究
RAW264.7细胞M1/M2亚型的诱导和鉴定
陈涛 梁潇 贺明 乌宇亮 袁祖贻
【摘要】 目的 诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7分化为M1/M2亚型，并分别根据其标志物的表达情况进行鉴定。方法 干预前一天以105
个/ ml密度铺好细胞，用不同浓度的IFN-γ+LPS干预，刺激分化为M1亚型；用不同浓度IL-4干预，刺激分化为M2亚型。分别于干预后12h提取细胞的总RNA。用realtime PCR方法对M1/M2亚型的标志物iNOS, CD86/MR（CD206），I型精氨酸酶(ArginaseI，Arg-I)进行mRNA水平表达量的鉴定，最终选择最合适的刺激浓度进行后续试验。结果 (1). 不同浓度干预试剂刺激12h后，大剂量干预组RAW264.7的细胞状态差，死亡细胞数多，中小剂量组细胞状态良好，完全贴壁，但细胞的形态发生改变；(2). 2.5ng/ml IFN-γ+200ng/ml LPS 共同作用12h后，RAW264.7的iNOS和CD86表达量最高，较基础水平有明显差异；(3). 10ng/ml IL-4作用12h后，RAW264.7的MR(CD206)和ArgI的表达量最高，较基础水平有明显差异。结论 用适当浓度的IFN-γ+LPS/IL-4刺激RAW264.7细胞12h，可使其分化为M1/M2亚型。
【关键词】 RAW264.7细胞；M1/M2亚型；炎症；动脉粥样硬化Introduction and Identi cation of M1/M2 Phenotype of RAW264.7 Cells
CHEN Tao1,LIANG Xiao1,YUAN Zuyi1,1Department of Cardiovascular Medicine,First Af liated Hospital,Key Laboratory of Environment and Gene Related Disease of Ministry Education,Xi’an Jiaotong University College of Medicine,Xi’an,710061,China.
【Abstract】 Objective To induce RAW264.7 cell line to M1/M2 phenotypes and identi cate the cytokines expressed on the surface. Methods Plating the cells in 12 wells plate as 105 / ml 24h before intervention and use IFN-γ+LPS to induce M1 phenotype,IL-4 to induce M2 phenotype, with different concertration. Extracting total RNA of cells after intervention. Detecting the surface marker iNOS, CD86/MR,(CD206),ArginaseI (ArgI) of M1/M2 phenotypes, respectively, by realtime PCR on RNA level to select the proper inducing concertration. Results (1). Cells retain well growth condition with inventional reagents of middle and smallest concertation but highest concertation; (2). iNOS and CD86 of RAW 264.7 cell increas-ing mostly after stimulated by 2.5ng/ml IFN-γ+LPS200ng/ml for 12h; (3). MR and Arg I of RAW 264.7 cell increasing mostly after stimulated by 10ng/ml IL-4 for 12h. Conclusion RAW264.7 cell can be induced to M1/M2 phenotypes after stimulated by proper concertration of IFN-γ+LPS/IL-
4,respectively.
【Key words】 RAW264.7 cell line; M1/M2 phenotypes; In ammation; Atherosclerosis(AS)
动脉粥样硬化（AS）被认为是慢性炎症性疾病［1］，巨噬径被诱导成为M2亚型后，则具有抗炎的作用［4］。在炎症的细胞参与了病程中脂质沉积到斑块破裂的所有过程［2］。目前，推进过程中，由于受到不同的细胞信号通路和细胞因子的调控对于巨噬细胞分型的研究成为该研究领域的热点，既往的研究和影响，M1/M2亚型的平衡一直处于动态变化中，向任何一认为在某些炎症性疾病中当巨噬细胞通过经典激活途径被诱导方的倾斜都决定了炎症的最终转归。根据已有的文献［5,6］，使成为M1亚型后，可促进炎症的进展［3］，而通过替代激活途
用iNOS和CD86，鉴定M1型巨噬细胞，使用MR和Arg I鉴定M2型巨噬细胞是经典方法，但是对于刺激剂量仍无统一的基金项目：国家自然科学基金资助项目(No.81025002；
标准，本研究旨在摸索出较为合适的刺激浓度，在细胞状态良No.30971219)；陕西省中医管理局资助项目《沙棘提好的基础上成功诱导出M1/M2巨噬细胞亚型。在AS中，如取物对apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生、发展能探明这一现象是否也符合上述研究的结论，则可以通过调控的作用研究》
M1/M2巨噬细胞比例，进一步影响AS的进展，为AS的治疗作者单位：西安交通大学医学院第一附属医院心血管内科；环境
提供了新的分子生物学靶点。
与疾病相关教育部重点实验室；陕西省分子心脏病学1 材料和方法
重点实验室
通讯作者：袁祖贻 Email: zuyiyuan@http://www.77cn.com.cn.
材料 小鼠巨噬细胞系RAW264.7由第四军医大学肿瘤生
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