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基础研究
2.2 IFN-γ和LPS共同作用可刺激RAW264.7成为3讨论
M1亚型：按照上述刺激浓度对于RAW264.7细胞进行干预本研究应用不同浓度的IFN-γ+LPS/IL-4干预RAW264.712h，realtime PCR检测及将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳细胞，摸索出合适的浓度，在细胞生长状态良好条件下使显示干预组细胞的M1型iNOS表达均有所升高，但大剂量RAW264.7细胞成功转化为M1/M2亚型，并使用各自的细胞联合干预组和未干预组相比无显著性差异，当联合干预剂量表面标志物进行了鉴定。
减小，iNOS的表达量反而增高，在M1-5，M1-6，M1-7和刺激剂量的确定是本研究的关键，根据已有的文献报M1-8四组的表达量与未干预组相比呈现显著性的升高；而道［7］，在分组的时候考虑了多种组合的方式，最终在实验CD86的表达只在M1-5和M1-6组呈现出显著性的升高，较中确定了最合适的刺激剂量。这对于后续的试验研究很有大和较小的干预剂量反而使CD86的表达呈现降低的趋势，意义，当巨噬细胞被干预成不同亚型之后，对于炎症转归但无统计学差异。（图２）
的调控具有一定的意义。
与既往的研究不同，本研究在考虑巨噬细胞是否能成功转化为M1/M2亚型的同时，细胞的数目和状态亦是重要的观察指标。在后续的干预性研究中，使用已成功转变亚型的巨噬细胞回输是重要的研究手段，所以，细胞的状态和数目也是实验成败的关键。
本研究中，前期实验考虑了刺激时间对细胞各指标的影响，但发现一旦干预时间超过16h，各组的细胞数目急剧减少，死亡较多，很难有足够的细胞数进行后续的试验，并且，细胞的生长状态较差，不利于进一步的干预和检测。因此，在正式的试验中选用了12h作为干预时间，这和Jamila K［6］所使用的条件相同。
以往的同类研究中，用于干预的刺激物较多，既往的体外实验证实，单独使用IFN-γ或IFN-γ与LPS联合使用，或图2 不同干预条件下RAW264.7细胞M1型标志物iNOS和
CD86
的IFN-γ与细胞因子如TNF-α和GM-CSF联合使用等均可诱mRNA水平表达。
导巨噬细胞分化成 M1型［8］，而在某些白细胞介素如IL-4、IL-13或TGF-β、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）2.3 IL-4可刺激RAW264.7成为M2亚型：realtime PCR激动剂、维生素D3,CD4+CD25+foxP3+Treg细胞，脂联素等检测及将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳显示三种浓度的IL-4的刺激下亦可诱导巨噬细胞向M2型分化［2,9-11］。本研究中选
刺激12h，与对照组相比，M2型巨噬细胞的标志物MR和用了IFN-γ+LPS干预，刺激分化为M1亚型；用IL-4干预，ArgΙ在mRNA水平具有不同程度的显著性升高。三组MR刺激分化为M2亚型，是在众多的研究基础上选择了较为经典表达水平的升高程度无太大差异，而ArgΙ的表达在小剂量干的刺激物，避免了对细胞生长产生较大影响。
预组反而升高最多。（图３）
在病理状态下，巨噬细胞可根据其获得的刺激信号分不同化成 M1或M2亚型，如脂肪来源的脂质可防止巨噬细胞向M1型转化［12］，则AS发生发展过程中M1和M2亚型巨噬细胞可同时存在于粥样斑块内。巨噬细胞的异质性说明微环境的不同刺激因子和信号可改变巨噬细胞亚型和功能，进而对疾病的转归产生影响。已有一些文献报道，在特定条件下，已分化的M1型和M2型巨噬细胞之间还可相互转化。例如，高脂饮食可导致脂肪组织巨噬细胞M2型向M1型转化，而运动则可以使转化方向逆转［13,14］，CD40L亦可诱导巨噬细胞向M1型极化，而IL-6可以诱导M1型巨噬细胞向M2型转化［15］。
AS作为一种严重危害人类健康的慢性炎症性疾病已被关注多年，但对于其发病机制的探讨仍众说纷纭［16］。在AS的发生发展过程中，巨噬细胞的作用贯穿始终，从脂质条纹的产图3 不同干预条件下RAW264.7细胞M2型标志物MR和Arg I的mRNA生到最终斑块破裂和心肌梗死，都起到不可或缺的作用。近期水平表达
的研究发现，巨噬细胞的亚型不同可能会影响炎症性疾病的转
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