Cre_lox位点特异重组系统在植物基因工程中的应用(5)

2021-01-28 19:50

年第期

陈广东等:Cre/lox位点特异重组系统在植物基因工程中的应用

所示。酶介导下,这些位点能表现出不同程度的活力;Cre基因的高度表达可能会导致基因重排等[37]。但是相信,随着技术的不断进步,Cre/lox特异位点重组系统将在基因工程中起到越来越重要的作用。

参 考 文 献

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图6 Cre介导的盒式交换[34

图6中靶位点含有一对异种特异性lox位点:loxP和lox2272。外源DNA片段中含有相同的一对异种特异性lox位点。由于loxP与lox2272的结构差异,Cre不能有效的介导分子内loxP与lox2272的切除反应。但能介导a和b两分子中相同的识别位点间 (即loxP与loxP或lox2272与lox2272间)进行重组。于是,两个lox位点间发生了双交换,使要整合进入的DNA片段替换了染色体的片段。

Louwerse等

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以loxP和lox5171为异种特异

性位点,首先将靶结构通过农杆菌介导的方法转化引入拟南芥基因组,靶结构含有方向相反的loxP位点和lox5171位点,这两个位点之间有bar编码区,可通过loxP外侧的35S启动子使loxP-bar表达。用于交换的T-DNA结构含有方向相反的loxP位点和lox5171位点,位点之间放置了一个无启动子的nptⅡ基因和gus基因。当Cre介导盒交换后,bar被高效表达的nptⅡ所取代,在含有卡那霉素的培养基上,重组子将被优先筛选,从而在拟南芥中实现稳定的RMCE。

4 结语

Cre/lox位点特异重组系统因其精确性和可预知性的特点,已经成为植物研究和生物技术产品商业化的有力工具,使人们定向、定点的对基因和染色。目前,虽然该系统还有些体进行操作成为可能[36]

不足,如植物基因组中含有一些潜在的、假lox位点,它们和野生型位点有部分的同一性,在野生型重组


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