与生物制药考试相关的一些思考题解答
制备基因工程药物的基本过程
1、构建基因文库。适合于无内含子的原核生物。
2、构建cDNA文库。适合于真核生物基因克隆。
3、PCR方式。
4、化学合成。已知基因或蛋白质全长序列，合成短的寡核苷酸片断，拼接为长的DNA片断，再用连接酶连接成完整基因。
1、原核表达体系
（1）大肠杆菌：目前采用最多的原核表达体系。
（2）枯草芽孢杆菌
（3）链霉菌
2、真核表达系统
（1）酵母
（2）丝状真菌。近年来在30种以上丝状真菌中建立了DNA转化体系。
（3）昆虫细胞表达体系。以昆虫细胞为表达宿主。
（4）哺乳动物细胞表达系统
大肠杆菌：目前采用最多的原核表达体系。革兰氏阴性菌
优势：遗传背景清楚，基因组序列已确定；生长迅速，平均20~30min繁殖一代；易于培养，生产成本低，适合大规模培养；外源基因表达水平高，可达总蛋白的5~30％以上；有大量可供选择利用的克隆和高效表达载体。
缺点：缺乏翻译后加工修饰系统，缺少糖基化功能；没有有效释放蛋白到培养基中的分泌机制；表达的外源蛋白多形成包涵体，蛋白的复性较困难；翻译目的蛋白N端常多一个甲硫氨酸残基（AUG编码）。
融合表达具有多方面的优点：
1、能使外源基因得到有效转译，防止包涵体的形成，促进蛋白质的正确折叠，限制蛋白酶