贵阳医学院2014届硕士研究生论文
11 浸泡，进行去RNA 酶处理。
（1）细胞加药后分别于24H,48H 和72H 弃去细胞培养液，用PBS 3ml 漂洗细胞两次后用胰蛋白酶处理。
（2）当细胞间间隙变大时，加入含有血清的培养基后将细胞溶液转移至RNase-Free 的离心管中，300³g 离心5 min ，收集细胞沉淀（仔细吸除所有上清）。轻弹离心管底部使细胞沉淀松散，加入适量裂解液RL 并旋涡震荡。
（4）将含有RL 的细胞沉淀转移至过滤柱CS 上，12000 rpm 离心2 min 后收集滤液。
（5）向滤液加入1倍体积70%乙醇混匀（此时可能会出现沉淀），于CR3吸附柱中加入得到的全部滤液， 12000 rpm 离心30-60 sec ，将倒掉废液的吸附柱CR3放回收集管中。
（6）向吸附柱CR3加入350μl 去蛋白液RW1，12000 rpm 离心30-60 sec ，将倒掉废液的吸附柱CR3放回收集管中。
（7）DNase I 的配制：取10μlDNase I 放入RNase-Free 离心管中，加入70μl RDD 溶液轻柔混匀。向吸附柱CR3中央加入80μl 的DNase I 工作液，室温放置15min 。
（8）向吸附柱CR3加入350μl 去蛋白液RW1，12000 rpm 离心30-60sec ，倒掉收集管的废液并将吸附柱CR3放回收集管中。
（9）向吸附柱CR3加500μl 漂洗液RW ， 室温静置2 min ，12000 rpm 离心30-60 sec ，倒掉收集管的废液并将吸附柱CR3放回收集管中。重复步骤9。
（10）12000 rpm 离心2 min ，倒掉废液后将吸附柱CR3置于室温放置，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
（11）将吸附柱CR3转入新的RNase-Free 离心管中，加入30-100μl RNase-Free 的ddH2O 室温放置2min ，12000rpm 离心2 min ，得到RNA 溶液。
（12）加入适量的DEPC 水溶解RNA 沉淀。
（13）总RNA 的纯度及完整度检测：取2μlRNA 溶液加于198μlddH 2O 中，紫外
线分光光度计检测在26Onm 和28Onm 的吸光度。1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定提的总RNA 的完整性。
2.4 HDAC2和p21 WAFI ／CIP1cDNA 的合成