贵阳医学院2014届硕士研究生论文
9 蒸馏水至 1000ml
11)TBST 缓冲液
20％Tween20 1.65ml
TBS 700ml
现用现配。
12)封闭液
脱脂奶粉 5g
TBST 100ml
现配现用
2、实验方法：
2.1细胞培养
2.1.1 细胞培养基:
肝癌细胞HpG2为贴壁细胞。用高糖DMEM 培养基含10%胎牛血清于5% CO 2、37℃
恒温培养箱培养。
2.1.2细胞传代
在细胞贴壁生长达80%～90%融合度时进行传代，首先弃旧培养液，用于37度温育的PBS 洗涤细胞1-2次（根据细胞培养液干净程度决定），加入1mL 0.25%胰蛋白酶液在显微镜下观察，观察细胞的胞质出现回缩，细胞之间的空隙逐渐增大后立即加入含10%胎牛血清的高糖的DMEM 培养基3ml 来终止胰蛋白酶液的消化。用枪头吸取瓶内的混合液，反复轻柔的把细胞从瓶壁上吹打下来。待细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液，分装入2个25 cm 2的培养瓶中，加培养液至每瓶6mL ，置于37℃，5% CO 2 培养箱中培养。
2.1.3细胞复苏
1）从液氮罐中取出有肝癌细胞HepG2细胞株的冻存管，立即投入37℃水中水浴，并不时轻轻摇动，使其尽快解冻。
（2）用75%的酒精棉花擦拭冻存管壁后，将其置于超净工作台上，打开管盖，用无菌玻璃吸管吸出细胞悬液转入15ml 灭菌离心管中，再向离心管中加入约8ml 细胞培养基，轻轻吹打悬浮细胞。
（3）1000r/min ，离心5min ，弃去上清。