贵阳医学院2014届硕士研究生论文
3
1,25(OH)2D 3抑制肝癌细胞HDAC2活性及促进
p21 WAFI ／CIP1
表达的研究
专 业：临床检验诊断学 研究生：孔维莹 导 师：黄韵祝 教授
摘要
目的：
本课题通过研究1,25(OH)2D 3对肝癌细胞中组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）的抑制作用和细胞周期蛋白的表达情况，探讨1,25(OH)2D 3是否通过抑制HDAC2表达来促进了p21 WAFI ／CIP1高表达，致使人肝癌细胞株停滞于GO/GI 期，从而调节肝癌细胞的增殖和分化。 方法：
本课题首先培养人肝癌细胞株（HpG2）,用CCK-8试剂盒检测1,25(OH)2D 3对细胞的增殖抑制作用，得出1,25（OH ）2D 3对肝癌细胞的抑制率的趋势；在不同时间点和不同浓度梯度用1,25（OH ）2D 3来处理细胞，提取细胞的核蛋白和RNA ，并用RT-PCR 技术检测p21WAFI ／CIP1 和HDAC2的mRNA 水平，用Western blot 印迹技术检测HDAC2和p21WAFI ／CIP1 蛋白的表达。 结果：
1、CCK-8试剂盒检测显示1,25（OH ）2D 3对肝癌细胞有抑制作用，并随着加药时间的延长和药物浓度的增加，抑制率呈现明显升高趋势，且各浓度实验组和对照组比较，差异都具有统计学意义。
2、用核蛋白试剂盒和RNA 提取试剂盒成功提取出加药组.乙醇组和对照组的核蛋白和RNA 。
3、RT-PCR 检测出在加药后的24H ，48H ，72H 随着1,25（OH ）2D 3浓度的增高，HDAC2的mRNA 表达水平呈降低趋势，各时间点的对照组和实验组差异有统计学意义;加药后的24H ，48H ，72H 随着1,25（OH ）2D 3浓度的增高，p21WAFI ／CIP1的mRNA 表达水平呈升高趋势。
4、Western blot 印迹技术检测在加药后的24H ，48H ，72H 随着1,25（OH ）2D 3浓度的增高，HDAC2的蛋白表达水平呈降低趋势，各时间点的对照组和实验组差