十四、原生质体融合直接亲本及其遗传标记的选择原则和方法
原则：一般选择具有较大遗传差异的近亲菌株；遗传标记主要是常用的营养缺陷型/抗性/孢子颜色等
灭活法: 再没有合适遗传标记时, 可以把双亲中任何一方原生质体用热灭活(如50℃,2h或60 ℃,5min), 或用紫外线/药物灭活, 然后和具有正常活性的一方融合
荧光标记:双亲用不同荧光染料标记,融合后选择同时具有两种荧光色素的融合体 十五、酶法分离原生质体
取健壮细胞悬浮于高渗溶液中,加入细胞壁水解酶, 在一定条件下酶解一定时间,再经过滤除去菌丝,离心收集原生质体,再悬浮于同一高渗溶液中备用
十六、主要融合剂 PEG、电场、激光
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