起着阻碍作用.
通过改变诸如速度、压力、温度和料液浓度之类的操作参数,可以降低浓差极化效应。
3.简述蛋白质复性的主要步骤和复性方法。
1.稀释复性与透析复性 2.色谱复性 3.凝胶过滤复性 4.金属螯合色谱复性 5.亲和色谱复性 6.其他吸附色谱复性
4. 色谱装置主要包括哪几部分及它们的作用。
由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统等四大部分组成。
一、高压输液系统
高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等组成。
1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑料制成,容量为1-2 L,用来贮存足够数量、符合要求的流动相。
2.高压输液泵 其功能是将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连续不断地送入液路系统,使样品在色谱柱中完成分离过程。由于液相色谱仪所用色谱柱径较细,所填固定相粒度很小,因此,对流动相的阻力较大,为了使流动相能较快地流过.
3. 梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例,从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化,达到提高分离效果,缩短分析时间的目的。
二、进样系统
进样系统包括进样口、注射器和进样阀等,它的作用是把分析试样有效地送入色谱柱上进行分离。
三、分离系统
分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。主要作用是分离样品的。
四、检测器
检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是:灵敏度高,重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。
5.简述亲和层析的分离过程。
1)选择合适的配体。
2)将配体固定在载体上,制成亲和吸附剂,而配体的特异性结合活性不被破坏。
3)当样品液进入亲和柱时,其中的特定生物分子与亲和吸附剂相结合,而被吸附在柱上。
4)未被吸附的杂质可随缓冲液洗掉。
5)用洗脱液将结合在亲和吸附剂上的特定生物分子洗脱下来。
四. 论述题(每小题15分,共15分)
请根据下游技术的一般工艺过程及它们的主要技术特点设计一套经济的且技术可行的提取纯化方案。(至少要涉及三种技术)
发酵液 提取 原材料:酵母 处理对象:酵母蔗糖酶
第一步:离心要沉淀。
第二步:破碎细胞。因为酵母蔗糖酶是胞内产物,所以要破碎细胞把酵母蔗糖酶释放出来,采用氨解法。 第三步:用氨解法抽提粗酶还含有大量杂质,需要进一步分离纯化,采用有机溶剂乙醇沉淀。
第四步:乙醇分级后的蔗糖酶仍含有许多杂质,这时用一些层析技术,如离子交换层析。
最后检测蔗糖酶纯度和得率。