液若显色，则与对照品相应的杂质斑点比较，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。
【注意事项】
1. 薄层色谱分析中为使斑点集中，点样应分次点加，每次点加后候，其自然干燥、低温烘干或经温热气流吠干。
2. 薄层板放入层析缸时，薄板底边应水平浸入展开剂中，待展开至溶剂前沿距玻板顶端1 cm时，取出薄层板。
3. 展开缸必须密封，为使缸内展开剂饱和，薄层板放入展缸前可在层析缸内壁贴滤纸条让滤纸条一端浸入展开剂中，密封层析缸，待系统平衡后再将薄层板放入展开。
【思考题】
1. 盐酸普鲁卡因注射液中还需要检查哪些项目?
2. 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸与对二甲氨基苯甲醛显色的产物是什么?
实验三 盐酸普鲁卡因注射液的含量测定
（提取容量分析法）(5学时)
【实验目的】
1.掌握提取容量法测定盐酸普鲁卡因注射液含量的原理和操作; 2.了解本法和重氮化法测定盐酸普鲁卡因注射液含量的优缺点.
【基本原理】
盐酸普鲁卡因是一个有机碱盐，易溶于水，不溶于有机溶剂，而其游离碱普鲁卡因则易溶于有
机溶剂，难溶于水。因此，采用氨试液将盐碱化，以氯仿提取游离碱，再蒸去氯仿，加过量的标准硫酸溶液，再用标准氢氧化钠回滴即可。其反应式如下： NH2NH2.HClCOOCH2CH2N(C2H5)2+ NH3.H2O+ NH4Cl + H2OCOOCH2CH2N(C2H5)2
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NH22+ H2SO4NH2.H2SO4COOCH2CH2N(C2H5)22COOCH2CH2N(C2H5)2
由于硫酸普鲁卡因显酸性，所以选用酸性区域变色的指示剂，比如：甲基红。
【实验材料、试剂与仪器】
原料名称 盐酸普鲁卡因注射液 规 格 普通市售 -- AR 用 量 5支 3 mL 45 mL 5 mL 适量 适量 氨试液 氯仿 乙醇 甲红指示 氢氧化钠溶液 硫酸溶液 中性 -- 0.05mol/L 0.025mol/L 25 mL 分液漏斗50 mL，过滤装置（抽滤瓶和布氏漏斗），电加热套，烧杯1000 mL，蒸馏装置（100 mL烧瓶、蒸馏头、冷凝管、接液管、锥形瓶等）, 滴定管，移液管25 mL。
【实验内容】
精密吸取本品适量（约与普鲁卡因0.20g相当）置分液漏斗中，加氨试液3 mL成碱性，分次用氯仿（依次为15，10，10，10ml）振摇提取，每次提取液滤过，合并氯仿液，滤器用少量氯仿洗净，洗液与滤液合并。在水浴上蒸发至近干，加中性乙醇5 mL与0.025 mol/L硫酸液25 mL，再在水浴上加热至氯仿的臭气完全消失，放冷，加甲红指示液数滴，用0.05 mol/L氢氧化钠液滴定剩余的硫酸。即得（每1ml的0.25mol/L硫酸液与13.64mg的C13H20N2O2·HCl相当）。
可按下式计算标示量的百分含量
标示量％=
?2?M'?V?H2SO4?M'?V'10?0.02??NaOH.7??2721000 ×100
或
'MH2SO4MNaOH13.64(25?VNaOH)?'0.0252MH2SO4' 标示量％=
10?0.02×100
本品含盐酸普鲁卡因（C13H20N2O2.HCl）应为标示量的95%-105%。
四. 注意事项
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1. 样品液碱化前应先加氯仿，以免游离基析出，沉积于分液漏斗活塞部分，在操作中损失。 2. 提取液应用氯仿润湿的棉花滤过，防止少量水混入，避免水溶性成份的影响。
3. 加入标准溶液前，氯仿液只能蒸至近干，加入标准酸溶液后，必须完全蒸除氯仿，以免影响含量测定结果。
五．思考题
1.ChP2010采用什么方法测定盐酸普鲁卡因注射液的含量，其操作条件有哪些要求？ 2.盐酸普鲁卡因注射液都需要检查哪些杂质，采用什么方法检测？
实验四 水杨酸钠的双相滴定法（4学时）
【实验目的与要求】
1. 掌握双相滴定法的基本原理和基本操作； 2. 熟悉水杨酸钠的检测原理与操作方法。
【实验原理】
水杨酸钠为水杨酸的钠盐，易溶于水，其水溶液显碱性，可采用盐酸标准液定量滴定。但滴定产物游离水杨酸不溶于水，在滴定过程中妨碍终点的观察。因此，在水相中加入与水互不相溶的有机溶剂，例如乙醚等，再以甲基橙为指示剂，边用盐酸标准溶液滴定，边强力振摇。这样，滴定中生成的水杨酸不断被萃取到有机溶剂中，使终点变化明显，同时降低水杨酸的离解。为使滴定完全，最后将有机层分出，用水洗涤，将可能混溶于有机层中的盐洗出，洗液并入水层，再另加入有机溶剂，继续以盐酸标准液滴定至水层显持续的橙红色。
COONaOHCOOHOH+HCl+NaCl
指示剂除用甲基橙外，也可用溴酚蓝，终点变化较为明显。 含量计算公式：
C7H5O3Na%?T?VHCl?f?100%
样品量式中：T—滴定度；f－滴定液浓度校正因子；VHCl－消耗滴定液体积；
【实验材料、试剂与仪器】
原料名称 2-(羟基)苯甲酸钠 乙 醚
规 格 普通市售 AR 8
用 量 1.5 g 50 mL
甲基橙指示液 盐 酸 0.1% 0.5 mol/L 1滴 适量 分液漏斗250 mL，滴定管，磨口塞锥型瓶250 mL, 滴定管。
【实验方法与步骤】
精密称取2-(羟基)苯甲酸钠约1.5 g，置于250 mL分液漏斗中，加蒸馏水约25 mL溶解后，加乙醚35 mL与甲基橙指示液一滴，用盐酸滴定液（0.5 mol/L）滴定，边滴边用强力振摇，至水层显橙红色，分取水层，置250 mL磨口塞锥型瓶中，乙醚层用蒸馏水5 mL洗涤，洗液并入锥形瓶中，加乙醚10 mL继续用盐酸滴定液(0.5 mol/L)滴定，边滴边用强力振摇，至水层显持续的橙红色。记录盐酸滴定液的总用量，计算2-(羟基)苯甲酸钠的含量。每1 mL的盐酸液(0.5 mol/L，需标定)相当于80.05 mg的2-(羟基)苯甲酸钠。
【注意事项】
1. 双相滴定操作是在分液漏斗中进行的，因此，分液漏斗的大小要合适，操作要正确。 2. 先在分液漏斗中加入少量的水，再加入样品。若先加入样品后再加入水，易使样品集聚在分液漏斗底部，使漏斗底部堵塞而无法分液。
3. 滴定过程中，振摇要充分。
4. 滴定结束后，要充分静止，使分液漏中水层与醚层完全分层后，再分取水层，并注意将水层全部分出，以免造成损失。
【思考题】
1. 水杨酸钠的含量测定，采用盐酸标准溶液直接滴定时，有什么缺点？ 2. 双相滴定操作的关键是什么？
3. 双相滴定法还适用于哪些药物的含量测定？
实验五 非水溶液滴定法测定马来酸氯苯那敏的含量（4 学时）
【实验目的与要求】
1. 掌握非水溶液滴定法的原理、操作与计算方法；
2. 掌握马来酸氯苯那敏测定时结晶紫指示剂的终点颜色判断。
【实验原理】
1. 结构与性质
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H3CCH3H.HCOOHCOOHN
C16H19ClN2.C4H4O4 390.87
马来酸氯苯那敏为白色结晶性粉末，无臭，味苦，在水、乙醇或三氯甲烷中易溶，在乙醚中微溶。按干燥品计算，含C16H19ClN2.C4H4O4不得少于98.5%. 2. 测定原理
有机弱碱，在水溶液中碱性较弱，不能直接滴定。若选择酸性溶剂，先生成有机碱的盐，使其碱性增强，然后用高氯酸标准溶液进行滴定，这样就可以测定有机弱碱的含量。
有机碱盐的非水滴定实质上是个置换滴定。即用强酸（HClO4）置换出有机碱结合的较弱的酸。
BH+A- + HClO4 = BH+ClO4- + HA
式中，BH+A- 表示有机碱盐，HA表示被置换出弱酸。
马来酸氯苯那敏为有机碱的有机酸盐，滴定中被取代出的有机酸为弱酸，在冰醋酸中酸性弱，不干扰滴定，因此相应盐的非水滴定和一般游离碱类药物相同，可直接进行。
【实验材料、试剂与仪器】
原料名称 结晶紫指示液 冰醋酸 马来酸氯苯那敏原料药 高氯酸 邻苯二甲酸氢钾 醋酸酐 规 格 0.5%的冰醋酸溶液 AR 普通市售 70% AR AR 用 量 2滴 1000 mL 0.31 g 8.5 mL 0.16 g 23 mL 1000 mL容量瓶，滴定管，锥形瓶，量筒。
【实验方法与步骤】
1. 高氯酸滴定液（0.1 mol/L）的配制与标定
（1）配制 取无水冰醋酸750 mL，置1000 mL容量瓶中，加入高氯酸（70%）8.5 mL，摇匀，在室温下缓缓滴加醋酐23 mL，边加边摇，加完后再振摇均匀，放冷，加无水冰醋酸至刻度，摇匀，放置24 h。若所测供试品易乙酰化，则须用水分测定法测定本液的含水量，再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01%~0.2%。
（2）标定 取在106 ℃干燥至恒重的邻苯二甲酸氢钾约0.16 g，精密称定，加无水冰醋酸20 mL使溶解，加结晶紫指示液1滴，用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1 mL高氯酸滴定液（0.1 mol/L）相当于20.42 mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度，即得。
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