培养基适用性检查验证方案 版本号:00 文件编号：VMP-VV-501-00
5.2.3.3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天的用3～5ml 含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤丝的无菌毛细吸管）至无菌试管中，取1ml加含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6,制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。 5.2.4验证方法：
5.2.4.1试验组：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件2。
5.2.4.2对照组：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各1ml，分别注入无菌平皿中，立刻倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23～28℃培养72小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件2。 5.2.4.3菌回收率计算：
试验组的菌回收率（%）= （试验组平均菌落数/ 对照组平均菌落数）×100%
5.2.5判定标准：菌回收率均应不低于70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。 5.2.6结论：对计数培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。 5.3控制菌培养基适用性检查： 5.3.1验证用菌种：
5.3.1.1来源： 食品药品检验所 5.3.1.2验证用菌种
菌种名称 大肠埃希菌(Escherichia coli) [CMCC（B）44 102] E- 内控编号 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC（B）26 003] S- 5.3.1.3培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定的方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中，然后加塞灭菌。在实验前加温熔化备用。
培养基名称
培养基批号 配制日期 有效期至 第 5 页 共 12页
培养基适用性检查验证方案 版本号:00 文件编号：VMP-VV-501-00 胆盐乳糖培养基 MUG培养基 乳糖胆盐发酵培养基 胆盐乳糖对照培养基 MUG对照培养基 乳糖胆盐发酵对照培养基 5.3.2菌液制备：接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液至10ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10～10，使细菌数约为500～1000cfu/ml。 5.3.3验证方法：
5.3.3.1促生长能力培养基：取大肠埃希菌各0.1ml，分别涂布于胆盐乳糖培养基、MUG培养基和乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上，在30～35℃培养18小时，观察菌落情况。测定结果见附件3。
5.3.3.2抑制能力培养基：取金黄色葡萄球菌各0.2ml，分别涂布于胆盐乳糖培养基和乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上，在30～35℃培养18小时，观察菌落情况。测定结果见附件3。
5.3.3.3指示能力培养基：取大肠埃希菌各0.2ml，分别涂布于乳糖胆盐发酵培养基及其对照培养基上，在30～35℃培养18小时，观察菌落情况。测定结果见附件3。 5.3.4判定标准：
5.3.4.1促生长能力培养基：试验培养基与对照培养基生长的菌落大小、形态特征应一致。 5.3.4.2抑制能力培养基：试验菌均不得生长。
5.3.4.3指示能力培养基：试验培养基与对照培养基生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应一致。
5.3.5结论：对控制菌培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。 6.变更和偏差处理：
验证过程中如果出现偏差和变更，应立即通知验小组对偏差和变更进行详细记录，分析偏差产生的根本原因并提出解决方法。所有偏差和变更得到有效处理后，验证方可进入下一步骤。偏差处理单和变更单经过批准后其原件必须附在验证报告中。见附件4。 7.验证结果评定及结论：
质量部负责收集各项验证试验结果，起草验证报告，报验证委员会。
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验证委员会负责对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书，确认培养基适用性检查情况。见附件5。 8.拟定再验证周期：
验证小组根据验证情况，拟定再验证周期，报验证领导小组审批。 9.会审及批准 会 审： 批 准：
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附件1
培训人员记录表 部 门 培训师签名
培训人员签名 日 期 签到日期 第 8 页 共 12页
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附件2
营养琼脂计数培养基
结果 营养琼脂 菌落数 1 菌落数 1 营养琼脂对照 菌落数 1 2 平均 1 2 平均 1 2 平均 菌落数 1 2 平均 1 2 平均 试验菌 大肠埃希菌 回收率 菌落观察情况 2 平均 1 金黄色葡萄球菌 2 平均 1 枯草芽孢杆菌 结果 试验菌 白色念珠菌 2 平均 玫瑰红钠琼脂 玫瑰红钠琼脂对照 回收率 菌落观察情况 2 平均 1 黑曲霉 2 平均 验证结果评定 操作人 复核人
日期 日期 第 9 页 共 12页