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文件编号： 元谋县人民医院 肠杆菌科纸片扩散法药敏 版本：第一版 微生物室作业指导书 试验标准操作规程 生效日期：2011-11-01 共 2 页 1．目的
规范肠杆菌科细菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。 2. 适用范围
本操作规程适用于肠杆菌科细菌。 3. 选药原则
在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。
3.1 现行版本的CLSI M02和M100对肠杆菌科细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。 3.2 细菌耐药监测网每年发布的监控要求。
3.3 本单位上一年度肠杆菌科细菌耐药监控数据。 4. 质控
用大肠埃希菌ATCC25922和大肠埃希菌ATCC35218（用于?内酰胺/?内酰胺抑制剂合剂）进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 5. 材料和仪器
M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。
6．操作步骤
参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 7. 判断标准 见表1
表1：杆菌科细菌纸片扩散试验判断标准
药敏纸片
氨苄西林（10?g） 哌拉西林（100??g）
氨苄西林/舒巴坦（10/10??g） 哌拉西林/他唑巴坦（100/10??g） 头孢唑啉（30??g） 头孢克洛（30??g） 头孢呋辛（30??g） 头孢噻肟（30??g） 头孢他啶（30??g） 头孢吡肟（30??g）
头孢他啶/克拉维酸（30/10??g） 头孢噻肟/克拉维酸（30/10??g） 亚胺培南（10??g） 美罗培南（10??g） 阿米卡星（30??g）
编写：常晓林 2011-09-10
判断标准（mm） 敏感(S) ≥17 ≥21 ≥15 ≥21 ≥18 ≥18 ≥18 ≥23 ≥18 ≥18 ≥16 ≥16 ≥17
中介(I) 14～16 18～20 12～14 18～20 15～17 15～17 15～17 15～22 15～17 15～17 14～15 14～15 15～16
耐药(R) ≤13 ≤17 ≤11 ≤17 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤14 ≤13 ≤13 ≤14
备注
参见结果解释
参见结果解释 参见结果解释
参见结果解释 参见结果解释 参见结果解释 参见结果解释 参见结果解释
审核：文佳琼 2011-11-11 批准：文佳琼 2011-11-01
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参见结果解释 参见结果解释 参见结果解释 参见结果解释
庆大霉素（10??g） 环丙沙星（5??g） 左氧氟沙星（5??g）
复方新诺明（1.25/23.75??g） 呋喃妥因（300?g）
头孢哌酮/舒巴坦（75/75??g） ≥15 ≥21 ≥17 ≥16 ≥17 ≥21 13～14 16～20 14～16 11～15 15～16 16～20 ≤12 ≤15 ≤13 ≤10 ≤14 ≤15
8. 注意事项
8.1 抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。变形杆菌属细菌可蔓延生长到某些抗菌药物的抑菌圈中，在量取抑菌圈直径时可忽略抑菌圈中薄的蔓延生长区域。测量复方磺胺药敏纸片的抑菌圈时，可忽略微弱的生长区域，而从细菌明显生长处量取抑菌圈直径。
8.2 沙门菌属和志贺菌属的细菌对一、二代头孢菌素及头霉素体外试验敏感，但临床治疗无效，因此不报告敏感。
8.3 肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属的细菌在使用三代头孢菌素治疗的过程中会产生耐药性，因此原本敏感的菌株可能会在使用抗菌药物治疗3-4日时产生耐药性，因此重复进行药物敏感试验是必要的。 9.结果解释
9.1 分离自粪便标本的志贺菌属和沙门菌属的细菌仅需进行氨苄西林、一种氟喹诺酮类药物及复方新诺明的药物敏感试验，如从肠道外标本中分离到这些菌株，还需增加氯霉素和1种三代头孢菌素的药物敏感试验。
9.2 对于脑脊液中分离到的肠杆菌科细菌，必须进行头孢他啶和头孢噻肟的药物敏感试验，以代替头孢噻吩和头孢唑啉的药物敏感试验。
9.3 对于沙门菌属和志贺菌属的细菌而言，氨基糖苷类抗菌药物可能在体外表现有抗菌活性，但在临床上无抗感染作用，所以这些细菌不能报告对氨基糖苷类抗菌药敏感。
9.4 肠道外沙门菌感染的病人所分离的沙门菌属细菌如对萘啶酸耐药，而对氟喹诺酮类敏感，在临床使用氟喹诺酮类时可能会治疗失败或对抗感染治疗反应迟缓。因此对肠道外感染的沙门菌属细菌需要检测其对萘啶酸的耐药性。如在临床上分离到这种细菌，应通知临床医师避免使用氟喹诺酮类药物。
9.5 有关产ESBL大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形杆菌的筛选和确证试验参见CLSI M100-S19中的附件A。
9.6 有关产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的筛选和确证试验参见CLSI M100-S19中的附件G。
参考文献
[1] CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Nineteenth Informational Supplement.CLSI document M100-S19.Wayne,PA:Clinical and Laboratory Standards Institute,2009
[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南formn大学出版社，2006
编写：常晓林 2011-09-10
审核：文佳琼 2011-11-11
批准：文佳琼 2011-11-01
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文件编号： 元谋县人民医院 假单胞菌属细菌纸片扩散 版本：第一版 微生物室作业指导书 法药敏试验标准操作规程 生效日期：2011-11-01 共2页
1．目的
规范假单胞菌属细菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。 2. 适用范围
本操作规程适用于假单胞菌属细菌。 3. 选药原则
在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。
3.1 现行版本的CLSI M02和M100对假单胞菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。 3.2 细菌耐药监测网每年发布的监控要求。
3.3 本单位上一年度假单胞菌属细菌耐药监控数据。 4. 质控
用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于?内酰胺/?内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 5. 材料和仪器
M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。
6．操作步骤
参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 7. 判断标准 见下表1。
表1 假单胞菌属细菌纸片扩散试验判断标准
药敏纸片
哌拉西林（100??g）
哌拉西林/他唑巴坦（100/10??g） 头孢哌酮（75?g） 头孢他啶（30??g） 头孢吡肟（30??g） 亚胺培南（10??g） 美罗培南（10??g） 氨曲南（30??g） 阿米卡星（30??g） 庆大霉素（10?g） 环丙沙星（5??g） 多粘菌素（300U）
头孢哌酮/舒巴坦（75/75??g）
8. 注意事项
编写：常晓林 2011-09-10
审核：文佳琼 2011-11-11
批准：文佳琼 2011-11-01
判断标准（mm） 敏感 ≥18 ≥18 ≥21 ≥18 ≥18 ≥16 ≥16 ≥22 ≥17 ≥15 ≥21 ≥12 ≥21
中介 16～20 15～17 15～17 14～15 14～15 16～21 15～16 13～14 16～20 16～20
耐药 ≤17 ≤17 ≤15 ≤14 ≤14 ≤13 ≤13 ≤15 ≤14 ≤12 ≤15 ≤11 ≤15
备注
参见结果解释
参见结果解释 参见结果解释 参见结果解释
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8.1 抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见菌落生长的区域，忽略只有用放大镜才能观察到的位于抑菌圈外缘的细菌菌落。
8.2 分离自囊性纤维化病人的铜绿假单胞菌的纸片扩散法药敏试验结果可靠，但药敏平板一定要孵育足24小时后方可报告。
8.3 铜绿假单胞菌在抗感染治疗期间会产生耐药性，因此初分离到的敏感菌在抗感染治疗3-4日后应重复进行药物敏感试验。 9.结果解释
对青霉素类药物，敏感的试验结果提示在临床治疗铜绿假单胞菌严重感染时应使用高剂量的治疗方案。单剂治疗可能会失败，这时应考虑联合使用其他菌株对其敏感的抗感染药物，如氟喹诺酮类或氨基糖苷类。
参考文献
[1] CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Nineteenth Informational Supplement.CLSI document M100-S19.Wayne,PA:Clinical and Laboratory Standards Institute,2009
[2] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南formn大学出版社，2006
编写：常晓林 2011-09-10
审核：文佳琼 2011-11-11
批准：文佳琼 2011-11-01
5
文件编号： 元谋县人民医院 不动杆菌属纸片扩散法药 版本：第一版 微生物室作业指导书 敏试验标准操作规程 生效日期：2011-11-01 共2页
1．目的
规范不动杆菌属细菌纸片扩散法药敏试验标准操作规程，确保药敏结果的准确。 2. 适用范围
本操作规程适用于不动杆菌属。 3. 选药原则
在本规程所列受试抗菌药物主要根据以下因素选择。
3.1 现行版本的CLSI M02和M100对不动杆菌属细菌纸片扩散法药物敏感试验的要求。 3.2 细菌耐药监测网每年发布的监控要求。
3.3 本单位上一年度不动杆菌属细菌耐药监控数据。 4. 质控
用大肠埃希菌ATCC25922、大肠埃希菌ATCC35218（用于?内酰胺/?内酰胺抑制剂合剂）和铜绿假单胞菌ATCC27853进行质量控制，质控菌株可接受的抑菌圈范围参见现行版本的CLSI M100-A19。质控频率参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 5. 材料和仪器
M-H培养基、无菌生理盐水、药敏纸片、无菌棉签、35℃孵育箱、测量尺、标准比浊管或比浊仪。
6．操作步骤
参见《药物敏感性试验标准操作规程》。 7. 判断标准 见下表1。
表1 假单胞菌属细菌纸片扩散试验判断标准
药敏纸片
哌拉西林（100??g）
哌拉西林/他唑巴坦（100/10??g） 头孢他啶（30??g） 头胞噻肟（30??g） 头孢吡肟（30??g） 亚胺培南（10??g） 美罗培南（10??g） 阿米卡星（30??g） 庆大霉素（10?g） 环丙沙星（5??g）
头孢哌酮/舒巴坦（75/75??g）
判断标准（mm） 敏感 ≥21 ≥21 ≥18 ≥23 ≥18 ≥16 ≥16 ≥17 ≥15 ≥21 ≥21
中介 18～20 18～20 15～17 15～22 15～17 14～15 14～15 15～16 13～14 16～20 16～20
耐药 ≤17 ≤17 ≤14 ≤14 ≤14 ≤13 ≤13 ≤14 ≤12 ≤15 ≤15
备注
8. 注意事项
抑菌圈直径量取的范围为包括药敏纸片在内的被药物完全抑制的区域（肉眼判断）。药敏平板应置于无反光的黑色背景下，用反射光源肉眼观测。测量区域应为肉眼观察无明显可见
编写：常晓林 2011-09-10
审核：文佳琼 2011-11-11
批准：文佳琼 2011-11-01