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图2-3 方案一流程图
方案二：取2000g紫穗槐种子，粉碎后烘干。称取500g紫穗槐种子粉末（其余留下备用），与1000ml乙醇混合于三口烧瓶里，按图2-1的装置进行水浴83摄氏度加热，搅拌48小时。
冷却到室温后，用真空旋转蒸发仪进行抽滤，得到乙醇提取物。然后真空旋转蒸发浓缩，得到深红色粘稠液体（在旋蒸的过程中要注意防止爆沸，加入的提取液不能超过圆底烧瓶的一半），静置与烧瓶中，用封口胶封好以防止溶液挥发。并将乙醇回收利用。对得到的深红色粘稠液体再进行液相——质谱连用分析，观察进样前和进样后的质荷比和相对丰度的变化，并做好记录以备分析。如流程图2-4：
图2-4 方案二流程图
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方案三：称取粉碎过的500g紫穗槐种子粉末，与1000 ml乙醇混合于三口烧瓶里，按图2-1的装置图，水浴83摄氏度加热，反应48小时（此方案未进行搅拌）。
冷却到室温，抽滤，得到乙醇提取物，然后真空旋转蒸发浓缩，后得到深红色粘稠液体（在旋蒸的过程中要注意防止爆沸，加入的提取液不能超过圆底烧瓶的一半），并将乙醇回收利用。
将旋转蒸发后的粘稠液体浓缩后分配于5%的盐酸（HCL）和氯仿（CHCl3 ）溶液，分液漏斗萃取出氯仿层，经无水硫酸钠(Na2SO4)干燥，抽滤，经旋转蒸发仪蒸出一定量的氯仿，回收利用（氯仿为毒性有机物在萃取以及旋蒸的过程中要注意自我保护不要大量吸入），得到暗色具有生物活性的油状液体。将此油状液体分配于90%的甲醇和石油醚的混合溶液中。用封口胶封好以防止溶液挥发。对得到甲醇相进行液相——质谱连用分析，观察进样前和进样后的质荷比和相对丰度的变化，并做好记录以备分析。流程图如图2-5。
图2-5 方案三流程图
液相质谱联用仪测定过程：
（1）开空气泵、液相色谱和质谱仪电源开关，开PC、机后使其联机成功，之后打开真
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空泵阀门。
（2）真空度达到2╳10-5 Pa后，通过调谐系统检查质谱运行情况。
(3)定液相色谱和质谱参数: 选择合适的色谱柱、流动相，设置梯度程序及柱温。选择离子源模式，设置质谱参数。数据采集的范围及条件设置。
(4)按设定的色谱条件运行一遍空程序以检查基线和本底，若发现柱子不干净则应冲洗柱子和质谱仪，直至基线平稳无峰为止。
(5)PC机上运行设置好的程序。待工作站显示仪器状态为“Ready”时，设置样品信息，进样。按“Start”键，PC机自动采集数据。
(6)运行好样品后，冲洗色谱柱，流动相中如含有挥发性缓冲盐，用5甲醇冲洗排出流路中可能有的缓冲液。
(7)放真空，再关液相色谱、质谱和PC机电源。
(8)调出谱图，根据定性及定量分析的需要，分别打开离子色谱图和质谱图，进行分析。
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第3章 结果与讨论
对紫穗槐果实中化合物提取的研究，方案一为直接将购进的紫穗槐果实加乙醇溶剂进行萃取；方案二为物理对照实验，将紫穗槐果实经粉碎处理后做相同的乙醇萃取处理；方案三再改变萃取条件，对粉碎处理的紫穗槐果实用5%的盐酸和氯仿萃取，再用甲醇萃取处理，最后对比三种提取方法处理下得到的提取物成分及产量，得到结论如下：
3.1 为粉碎的紫穗槐果实的乙醇萃取结果
方案一得到如图3-1、3-2的液相质谱图：
图3-1未粉碎紫穗槐果实提取物的乙醇溶液液相谱图（48h）
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图3-2未粉碎紫穗槐提取物的乙醇溶液质谱图（48h）
图3-1紫穗槐提取物的乙醇溶液（48h）为以甲醇为流动相，ESI源的液相色谱图，由于使用甲醇为流动相，甲醇极性很大，在很短时间内把紫穗槐提取物的乙醇溶液中大部分的有机成分都洗脱出来，由此可得一个总量的大峰，第一幅图为洗脱出的总的成分的量为红色曲线；第二幅图为在相同的时间进度下，Amorfrutin的量的曲线图，通过对比可以看出在总的乙醇所含成的中，Amorfrutin所占的比重可达70~80%。第二幅图中的相对分子质量339为Amorfrutin的碳的同位素的化合物。
从图3-2紫穗槐提取物的乙醇溶液质谱图（48h）可以看出，由原来未进样前的质荷比(m/z)为：301.0，310.9，313.0，319.7，350.1，369.0，变为图上的309.0，315.1，326.1，339.0，341.1，342.1，在所测样进入色谱仪中之后，大约半分钟内质荷比为质荷比(m/z)为339.0以及质荷比340的峰逐渐增高，之后的一段时间内340的相对丰度与其他峰的比值接近10:1。其中质荷比(m/z)为339.0为Amorfrutin裂解掉一个H自由基所得质荷比，340为Amorfrutin未裂解的质荷比，两者的相对丰度与其他峰比较相差巨大，有力的证明了在我们本土生长的紫穗槐种子中，含有一定量的Amorfrutin，而具体的 Amorfrutin A、Amorfrutin B的分类则有待进一步实验的分析。
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