阴沟肠杆菌的生物危害评估报告
一、细菌的传播与致病
阴沟肠杆菌广泛分布于环境中，土壤、水、污水、腐烂蔬菜和乳制品亦可发现，在阴沟污水中含量可高达10７/g。它是存在于人和动物肠道内的条件致病菌，易致泌尿道和呼吸道感染，它也可发生伤口感染、菌血症和败血症，尤其易发于下列危险因素的患者：如长期住院（特别是在ICU）、患严重疾病、长期应用广谱抗生素、进行侵袭性操作、应用放疗或化疗及免疫抵制剂等患者。据报道：在重症监护病房（ICU）的革兰阴性菌感染中，肠杆菌属细菌的感染仅次于铜绿假单胞菌，居第二位。
二、细菌的生物学特性
阴沟肠杆菌属于肠杆菌科肠杆菌属，为革兰氏阴性粗短杆菌，有周身鞭毛、无芽胞，兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上能够形成大而湿润的粘液状菌落。在血琼脂平板上不溶血，在肠道选择性培养基上可发酵乳糖形成红色菌落。
三、细菌的实验室检查及其它检查
1.标本采集 采自不同感染部位的各种标本如粪便、血液、尿液等； 2.染色镜检 为革兰氏阴性粗短杆菌
3.分离培养 可选用血平板、MAC、EMB等；
4.生化鉴定 是主要的鉴定依据。IMViC试验呈――＋＋；动力和鸟氨酸脱羧酶试验均为阳性——此可以与IMViC试验同为――＋＋的肺炎克雷伯菌相区别；在同属菌种之间：阴沟肠杆菌对赖氨酸/精氨酸/鸟氨酸的反应为―＋＋。
四、细菌的防治
由于阴沟肠杆菌为条件致病菌，所以要加强院内感染的监测，对于久病，特别是合并致免疫功能低下的基础病患者，应规范操作，特别是侵袭性操作患者，应重视该菌的培养， 鉴于该菌耐药性较高，临床应首选喹诺酮类和氨基糖甙类抗菌药尽可能减少青霉素类及一、二代头孢抗生素应用，对重症患者可选用亚胺培南。同时应重视避免或缩短侵入性操作，加强消毒隔离，减少耐药菌株的产生和扩散。
五、细菌的生物安全防护
根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）阴沟肠杆菌属于三类，BSL-2。
在实验室操作上对于有高风险的人员，如免疫缺陷者，要严格限制进入。对于针头和锐器要有警示，要用专门存放锐器的容器盛装。在个人防护上，要求穿隔离衣，出实验室时应将隔离衣脱下；在可能接触病原时要戴一次性使用的手套，但不要戴手套接触清洁表面（如电话等），脱去手套后要洗手；在BSC外面进行操作时，要进行面部保护，如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼台，还要有高压消毒器。
小肠结肠炎耶尔森菌的生物危害评估报告
一、细菌的传播与致病
小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布于自然界，是能在冷藏温度下生长的少数几种肠道致病菌之一。本菌天然寄居在多种动物体内，如猪、鼠、家畜等，通过污染食物（牛奶、猪肉等）和水经粪—口途径感染或因接触染疫动物而感染。它除引起胃肠道症状外，还能引起呼吸系统、心血管系统、骨骼结缔组织等疾患，甚至可引起败血症，造成死亡。该菌还是重要的食源性致病菌，很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目。
本病多发生于冬春季节，可散发或暴发流行，多累及婴儿及儿童。不同年龄患者的症状有所不同，5岁以下患儿以腹泻为多见，临床表现与菌痢不能区别。本病为自限性的轻型急性胃肠炎，一般表现为腹泻、发热和腹痛，粪便呈黄色水样或含粘液，带血或血便者较少见，腹泻每日3～10次，可持续1～2周，个别可长达3个月。偶可引起肠道溃疡、穿孔和腹膜炎。慢性腹泻常持续数月，甚至可拟似慢性特发性炎性肠病。发热从短期高热到持续几周的低热不等，亦为本病的突出症状。5岁以上儿童和青少年常有下腹痛，末梢血白细胞总数增加，症状极似阑尾炎。在成人中，肠炎后1～2周，有的可出现结节性红斑，常见的并发症为活动性关节炎。此外，尚有脑膜炎及败血症等临床类型。
但国内既往对该菌重视不够，医务人员普遍缺乏对本菌的认识，临床医生在对胃肠道疾病诊断时很少考虑小肠结肠炎耶尔森菌感染，检验人员也很少能为准确诊断提供依据。由于诊断不及时，容易造成误诊，多数小肠结肠炎耶尔森菌感染病人很难得到及时、针对性治疗，造成感染慢性化和并发各种合并症，有些小肠结肠炎
耶尔森菌感染甚至被当作阑尾炎施行手术。
二、细菌的生物学特性
小肠结肠炎耶尔森菌肠杆菌科耶尔森菌属，为革兰氏阴性小杆菌，有毒菌株多呈球杆状，无毒株以杆状多见。对营养要求不高，能在麦康凯琼脂上生长，但较其他肠道杆菌生长缓慢，培养的最适宜温度为28℃，最适pH值为7～8，初次培养菌落为光滑型，通过传代接种后菌落可能呈粗糙型。
本菌具有“嗜冷性”，在水中和低温下(4℃)能生长，为肠道中能在4℃生长繁殖的少数细菌之一。因此，食品冷藏保存时，应防止被该菌污染。
野生动物、家畜(猪、狗和猫)、牡蛎和水源中都能分离到本菌，亦可从健康人或患者粪便中分离得到，其传播方式可能与摄入被尿、粪便污染的食物(尤其是肉类)和接触感染动物等有关。
本菌可产生耐热肠毒素，121℃30分钟不被破坏，对酸碱稳定，pH1～11不失活。肠毒素产生迅速，在25℃下培养12小时，培养基上清液中即有肠毒素产生，24～48小时达高峰。肠毒素是引起腹泻的主要因素。毒力型菌株均有VW抗原(蛋白脂蛋白复合物)，为毒力的重要因子，与侵袭力有关，侵袭力可能是耶尔森菌感染肠道表现的病理基础。
三、细菌的实验室检查及其它检查
1.标本采集 常为粪便以及食物，也可取血液和尿液等。
粪便标本采集要求:采集的动物粪便标本应新鲜,病人的粪便标本最好在发病3-5病日内,使用抗生素之前.粪便采集量每份不少于5克,置于干净塑料袋
或置于运送培养基中于6小时内送实验室检测,夏季标本的保存和运送要注意冷藏.原则上每天采集的标本可分两次送至实验室,即上午的标本中午12时前送到,下午的标本晚6时前送到,以便于及时开展检测。
2.分离培养——以粪便标本为例
（1）冷增菌 粪便与改良磷酸盐缓冲液以1:10混合 于4℃增菌，并于10天,20天分别转种麦康凯MAC平板或耶尔森菌属专用选择性培养基CIN 于25℃培养24～48h 。
（2）该菌的菌落在MAC平板上呈无色透明，在CIN平板上呈粉红色，偶尔有一圈胆盐沉淀；
（3）将可疑菌落接种改良克氏双糖培养基25℃培养24h～48h ，上、下层均为阳性(即显黄色)者接种Rustigian氏尿素培养基(使成浓厚菌悬液),振荡10秒钟25℃培养2～4h。
（4）尿素阳性者再接种半固体各2管 ，1管于25℃培养24h，另1管于37℃培养24h。该菌在25℃动力阴性，37℃动力阴性。
3.生化鉴定(25℃培养) ：典型小肠结肠炎耶尔森菌主要的生化反应情况：脲酶阳性、硫化氢阴性、VP25℃阳性、鸟氨酸脱羧酶阳性。发酵葡萄糖、蔗糖产酸不产气，不发酵密二糖和鼠李糖。
4.血清分型
四、细菌的防治
症状较轻时，本病多为自限性，无需抗菌治疗。宜进行适当隔离，粪便及排泄物要消毒，以免疾病传播。有失水者及时补液，以纠正水、电解质、酸碱紊乱。对病程较长，有并发症或呈暴发型者，应给予抗菌治疗。本菌对所有氨基糖甙抗生素、多粘菌素、复方新诺明、四环素、呋喃唑酮和喹诺酮类等均敏感。
五、细菌的生物安全防护
根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）小肠结肠炎耶尔森菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：
（1）操作要求
1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。
4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。
5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊
7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。
8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。
9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。
（2）安全设备
1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。
2、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。
3、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。
4、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。
5、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。
铜绿假单胞菌的生物危害评估报告
一、细菌的传播与致病
假单胞菌普遍存在,而在潮湿环境尤甚。铜绿假单胞菌是存在于人类中最常见的一种假单胞菌，它偶尔可在腋下和肛门生殖道周围的正常皮肤,但除非给服抗生素,在粪中甚为罕见。该菌通常伴随毒力较强的细菌存在于病灶中,但偶尔也可单独引起暴露于外部的组织感染.假单胞菌感染通常发生于医院内。洗涤槽,防腐溶液和贮尿容器中常可发现这种细菌。通过医护人员可将病菌传给病人,特别在灼伤和新生儿重症监护室.是重要的医院内病原菌。
铜绿假单胞菌引起的很多感染发生在衰弱或免疫受损的住院病人，它是重症监护室感染的第二位最常见的病原菌,是换气机相关性肺炎的常见原因。除医院内获得感染外,HIV感染者很容易在社区获得该菌的感染,而且一旦被铜绿假单胞菌感染,常可出现晚期HIV感染的体征。
铜绿假单胞菌感染可发生于很多解剖部位,包括皮肤,皮下组织,骨,耳,眼,尿路和心脏瓣膜。感染部位与细菌的入口及病人的易感性有关。烧伤时,焦痂下区域可成为大量细菌侵犯的场所,进而成为引起菌血症的病灶,而菌血症常是烧伤的致死性并发症。
本菌所致感染的临床表现取决于受累部位。在住院病人中,若口咽部有绿脓杆菌和其他革兰氏阴性杆菌共同繁殖,则气管插管,气管切开或间歇性正压呼吸可引起肺部感染。囊性纤维病的后期铜绿假单胞菌性支气管炎常见，分离得到的菌株有粘液状菌落的形态学特征。烧伤伴有恶性肿瘤的病人常见在其血液中分离出该菌株,临床表现为革兰氏阴性败血症,有时出现坏疽性深部脓疱,其特征为直径约1cm的紫黑色病变,中央区溃疡,四周为红斑。这种病变最常见于腋下和肛门生殖器部位。该菌还是
尿路感染的常见病原菌,特别常见于有过泌尿科操作的病人,尿路梗阻的病人或接受广谱抗生素的病人。
热带气候条件下常见的外耳炎流脓是耳部铜绿假单胞菌感染最常见的临床类型。糖尿病患者可发生更为严重的恶性外耳炎,表现为严重耳痛常伴有单侧颅神经麻痹,需要肠外给药治疗。绿脓杆菌眼部感染一般表现为角膜溃疡,最多见于外伤之后,但有些病人也可因角膜接触镜片或镜片液体污染而感染。引流的窦道,特别在足部外伤或深部穿刺伤后,可发现该菌菌。引流物常有汗味和果味.这种穿刺伤有很多可引起铜绿假单胞菌性蜂窝织炎和骨髓炎,为此除抗生素外,还要早期外科扩创。
罕见情况下该菌可引起心内膜炎,通常发生于心脏直视手术所装的人工瓣膜或静脉吸毒者的自然瓣膜上。右侧心内膜炎用内科治疗,但为根治累及二尖瓣,主动脉瓣或人工瓣膜的感染,通常必须将感染的瓣膜切除。
二、细菌的生物学特性