铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，是一种非发酵革兰阴性菌，菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有一根鞭毛，在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。本菌生长温度范围25~42℃，最适生长温度为35℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。需氧生长，在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素。在血平板上会溶血。
该菌含有O抗原（菌体抗原）以及H抗原（鞭毛抗原）。O抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。O抗原可用以分型。
细菌的实验室检查及其它检查
1.标本采集 采自不同感染部位的各种标本，包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。
2.染色镜检 为革兰阴性菌，菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有一根鞭毛。
3.分离培养 对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基如MAC；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通或血琼脂培养基。在普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落，该菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色；在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽；如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基底部细菌的生长不良。
4.生长实验 该菌在4℃不生长而在42℃可以生长。
5.生化鉴定 该菌能氧化分解葡萄糖但不分解甘露醇、麦芽糖和蔗糖。不产生吲哚、常不液化明胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氧气。
6.分型
（1）噬菌体分型 所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%。
（2）血清学分型 利用O抗原进行分型，目前可分20个血清型。
（3）质粒指纹图分析：此项技术是对同种细菌的不同株进行同源性分析的一种方法。根据细菌携带质粒的情况进行分析。
三、细菌的防治
及时隔离治疗患者，同时提高医院内的消毒水平以及症疗操作的规范和安全，能够切实降低铜绿假单胞菌的院内感染水平。
在治疗方面，若感染位于外表而且局限,可用1%醋酸冲洗或局部应用多粘菌素B或多粘菌素E,即可奏效。坏死组织必须扩清,而脓肿则必须引流。
若需肠外给药治疗,用妥布霉素或庆大霉素5mg/(kg.d)分剂给予,可治愈大多数铜绿假单胞菌性尿路感染。根据临床反应,可将剂量减少到3mg/(kg.d)以尽量减少副作用。肾功能不全者的剂量必须减少。对酶介导耐妥布霉素和庆大霉素的铜绿假单胞菌应该用丁胺卡那霉素.很多专家主张治疗严重铜绿假单胞菌感染可用氨基糖苷类再加一种抗假单胞菌的β-内酰胺.几种青霉素,包括替卡西林,哌拉西林,美洛西林和阿洛西林对铜绿假单胞菌也有效。其他有良效的药还有头孢他定,头孢平,氨曲南,亚胺培南,美罗匹宁和环丙沙星。替卡西林最为常用,其剂量为16~20g/d,静脉注射。哌拉西林,阿洛西林,头孢平,头孢他定,美罗匹宁和亚胺培南体外试验对某些耐替卡西林菌株有效。
对全身性感染或粒细胞缺乏的病人,应该用一种对铜绿假单胞菌有效的氨基糖苷与一种抗假单胞菌青霉素合用。对嗜中性白细胞减少并且肾功能处于边缘状态的病人,可用非氨基糖苷类联合疗法,例如双重β-内酰胺或β-内酰胺加一种氟喹诺酮,也是安全的。尿路感染常可用羧茚苄青霉素或环丙沙星或其他氟喹诺酮类药物治疗。但氟喹诺酮类不应该用于儿童,因为该药对软骨有不良作用。两种抗假单胞菌药物合用时,在治疗过程中出现耐药菌株的机会明显减少。
四、细菌的生物安全防护
根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）铜绿假单胞菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：
（1）操作要求
1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。
4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。
5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。
7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。
8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医
学评估、观察、治疗，保留书面记录。
9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。
（2）安全设备
1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。
2、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。
3、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。
4、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。
5、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。
嗜水气单胞菌的生物危害评估报告
一、细菌的传播与致病
嗜水气单胞菌在自然界中广泛分布，它是水中常居菌，可以从生水、氯化水和污染水中分离到，每年的5月至11月，该菌在水中的含量最高。它有致病性菌株和非致病性菌株之分，致病性菌株可感染鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类等动物。人亦可因致病性嗜水气单胞菌感染而发生肠道内和肠道外的感染。肠道内的感染主要表现为腹泻及食物中毒，占夏季腹泻的第二或第三位。腹泻的程度从较温和的腹泻（分泌性腹泻）至严重的细菌性痢疾样腹泻（脓血便）均有，少数情况下还可引起霍乱样腹泻。好发人群为5岁以下的幼儿。此外临床上还可表现为急性出血性败血症，慢性感染表现为皮肤溃疡等。
二、细菌的生物学特性
嗜水气单胞菌属于气单胞菌属，是革兰氏阴性直杆菌，大小0.3~1.0um×1.0~3.5um，有动力。生长温度范围较宽，营养要求不高，普通培养基即可。但不能在TCBS上生长。
三、细菌的实验室检查及其它检查
1.标本的采集 根据不同的疾病分别采集粪便或肛试、血液、脓汁、脑脊液和血液等。待检样本可包括病料、水样及送检菌株，病料既可是无菌采取的易感动物的肾、肝、脾等未污染病料，也可是粪便或病变皮肤等污染病料，如样本为菌株，应先接种于普通肉汤28℃培养24h，再划线接种于普通琼脂平板，使之形成单个菌落，以供鉴定用；
2.染色镜检 呈革兰氏阴性短杆菌；
3.分离培养 嗜水气单胞菌在普通琼脂平板上，28℃培养24h后的菌落为光滑、微凸、圆整、无色或淡黄色，有特殊芳香气味；
4.氧化酶试验 嗜水气单胞菌应为阳性；吲哚试验 嗜水气单胞菌应为阳性；
5.AHM鉴别培养 挑取普通琼脂平板上氧化酶试验阳性的单个菌落少许。穿刺接种于AHM鉴别培养基上37℃培养24h。嗜水气单胞菌的表现为：顶部仍为紫色，底部为淡黄色；细菌沿穿刺线呈刷状生长，即运动力阳性；部分菌株顶部呈黑色。
6.糖发酵试验 嗜水气单胞菌可发酵葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、七叶苷及水杨苷等5种糖。
7.嗜水气单胞菌致病性鉴别：
（1）脱脂奶平板试验：取AHM鉴别培养基表面菌落少许，接种划线于1%脱脂奶蔗糖胰蛋白胨平板28℃培养24h。若菌落周围出现清晰、透明的溶蛋白圈，判为阳性。
（2）斑点酶联免疫试验：取AHM鉴别培养基表面菌落少许，接种蔗糖胰蛋白胨肉汤 28℃摇床（30r/min）培养48h，10000r/min离心10min，取上清。用微量加样器取5μL点样于硝酸纤微素膜光面 37℃烘干，置20%脱脂奶中， 37℃封闭1h。用含吐温-20的磷酸
盐缓冲液洗5次，每次2min；置1：50兔抗嗜水气单胞菌蛋白酶抗血清中，37℃作用1h，用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次，每次2min；置1：10酶标羊抗兔抗血清中，37℃作用1h。用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗5次，每次2min；加3，3-二氨基联苯胺-过氧化氢中显色。待斑点明显后，用去离子水终止显色。设无菌肉汤作阴性对照。以出现明显棕色斑点者判为阳性。
总结以上实验结果，符合以下特性者应判为致病性嗜水气单胞菌：
1）在普通琼脂平板上， 28℃培养24h后的菌落为光滑、微凸、圆整、无色或淡黄色，有特殊芳香气味；
2） 在AHM鉴别培养基上，顶部仍为紫色，底部为淡黄色；细菌沿穿刺线呈刷状生长，即运动力阳性；部分菌株顶部呈黑色；
3）氧化酶试验阳性，革兰氏染色为阴性短杆菌；
4）吲哚试验阳性，发酵葡萄糖、蔗糖、阿拉伯糖、七叶苷及水杨苷等5种糖类；
5）脱脂奶平板试验阳性或斑点酶联免疫试验阳性。
四、细菌的生物安全防护
根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）嗜水气单胞菌属于三类，BSL-2。在实验室操作上对于有高风险的人员，如免疫缺陷者，要严格限制进入。对于针头和锐器要有警示，要用专门存放锐器的容器盛装。
在个人防护上，要求穿隔离衣，出实验室时应将隔离衣脱下；在可能接触病原时要戴一次性使用的手套，但不要戴手套接触清洁表面（如电话等），脱去手套后要洗手；在BSC外面进行操作时，要进行面部保护，如套口罩、眼罩、面罩等。要有泡手消毒缸和洗眼台，还要有高压消毒器。