1×TAE电泳缓冲液,琼脂糖,EB(溴化乙锭),三角瓶,做胶托盘,电泳槽,电泳仪,微波炉,电子天平,0.25%溴酚蓝加样缓冲液,胶梳 四、步骤
1) 称取适量琼脂糖在三角瓶中,按照胶的浓度加入1×TAE缓冲液,在微波炉中加热溶解至完全透明。
2) 待冷却至60℃左右,加入终浓度为0.5ug/ml的EB,混匀。
3) 将胶床水平放置插好梳子,倒入琼脂糖凝胶溶液,梳子插入胶中3~5mm左右,放置30~60min,待凝胶完全凝固硬化。
4) 待检验PCR扩增产物中加入, 0.25%溴酚蓝加样缓冲液1~2ul,稍微离心。 5) 小心拔出梳子,检查样品孔完整性,样品孔中加入扩增后样品。 6) 将胶床,放入电泳缓冲液中,以5V/cm电压电泳。
7) 溴酚蓝泳动至胶3/4处时停止电泳,取出凝胶,在短波紫外线(254nm)下观察。
注意:记录点样顺序。
五、结果
记录扩增样品数量、电泳时间,条带的明亮度、多态性和模式图。
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