实验内容
实验一、从植物组织中制备基因组DNA 实验二、从哺乳动物组织中制备基因组DNA 实验三、质粒DNA的提取、酶切与电泳鉴定 实验四、DNA片断的纯化与定量
实验五、重组DNA分子的构建、筛选与鉴定 实验六、PCR扩增DNA技术
实验七、PCR扩增产物的限制性长度多态性（PCR-RFLP） 实验八、随机扩增多态性DNA技术（RAPD） 实验九、微卫星DNA技术
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实验一、从植物组织中制备基因组DNA
1．仪器
1．台式离心机 2．恒温水浴器
3．紫外分光光度计 4．琼脂糖凝胶电泳系统 5．紫外透射仪 6．微量移液器 2．材料
1．三羟甲基氨基甲烷（Tris） 2．乙二胺四乙酸（EDTA） 3．十六烷基-三甲基-溴化铵（CTAB） 4．氯仿
5．异戊醇 6．氯化纳 (NaCl) 7．β-巯基乙醇 8．乙醇 9．醋酸铵 10．液氮 11．陶瓷研钵 12．离心管 3．试剂
1．2%CTAB提取液 2. 氯仿：异戊醇：体积比24：1 3. 7.5M醋酸铵 4. TE缓冲液
3.操作步骤 （一）DNA的提取
1．每组取1g新鲜叶片放入预先经过冷处理的研钵中，在液氮中研磨成粉末状。 2．将细粉末转移到1.5 ml的Eppendorf管中，分别加入1ml CTAB提取液，充分混匀，置于65℃水浴中保温1 h。
3．从水浴中取出离心管，12 000 rpm离心10 min，将上清液转移至另一新离心管中。
4．每管中加入1/2体积的氯仿/异戊醇（24：1），轻缓地颠倒混匀，12 000 rpm离心5 min，上清液转至另一新离心管中。
5．每管中加入1/10体积的7.5 M醋酸铵和等体积的冰乙醇（100%），混匀，放置在-20℃冰箱中30 min或在室温下过夜。
6．12 000 rpm离心15 min获得DNA沉淀，70%乙醇洗2次，风干沉淀。 7．加入30ul TE缓冲液（含有10ug/ml RNase A）溶解DNA，并贮存在4℃冰箱中。
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（二）紫外分光光度法测定DNA含量
1． 吸取2ul DNA样品，加水至2 ml，混匀后，转入石英比色皿中， 2． 紫外分光光度计先用2 ml纯水校正零点，
3． 在260nm和280nm分别读出光密度，DNA样品的浓度为OD260×核酸稀释浓度×50/1000；浓度为ug/ul。 （三）琼脂糖凝胶电泳检测 1． 制备1%的琼脂糖凝胶；
2． 取2 ul样品，加3ul上样缓冲液（含溴酚蓝）和12ul无菌水，混匀； 3． 取一系列浓度不同的2ul标准样品（0.5-50ug/ml），分别加入3ul上样缓冲液和12ul无菌水，混匀后小心上样，开始电泳；
4． 将电泳后的凝胶浸入溴化乙锭染色液中染色，然后在紫外透射仪上观察结果，比较样品DNA和标准DNA的荧光强度，并估算出待测样品中的DNA浓度。
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实验二、从哺乳动物组织中制备基因组DNA
1．仪器
手术剪刀、眼科剪刀、酒精灯、台式高速离心机、电泳仪、电泳槽、微量移液器、凝胶成像系统、恒温培养箱、恒温水浴锅、电子秤量器、摇床、离心管、枪头、乳胶手套等
2．材料
猪冷冻肌肉组织、GL2000分子量标记。
3．溶液及试剂
1）化学试剂
TE 缓冲液、Tris饱和酚、氯仿、异戊醇、异丙醇、70%乙醇 2）酶类
蛋白酶K、RNA酶 4）电泳类试剂
1×TBE电泳缓冲液、6×蔗糖上样缓冲液、溴化乙锭溶液（EB）、琼脂糖凝胶
4．操作步骤
1.用剪刀剪取猪冰冻肌肉组织0.2～0.5g于1.5ml离心管内。
2．立即加入700ul STE液（含RNA酶），同时加入77ul 10％SDS液（总体积1/10），用眼科剪刀剪碎组织样品。
3．加入16ul蛋白酶K(20mg/ml),指弹混匀。
4．56℃消化8小时以上，直到肌肉组织颗粒消化完毕。 5．加700ul Tri饱和酚，置脱色摇床抽提2小时。 6．8000rpm离心5分钟，取上清液于另一1.5ml离心管中。 7．加700ul 酚氯仿(1:1)于离心管中，置于脱色摇床抽提1小时。 8．8000rpm离心5分钟，取上清液于另一1.5ml离心管中。 9．加700ul氯仿－异戊醇（24:1），置于脱色摇床抽提1小时。 10．8000rpm离心5分钟，取上清液于另一1.5ml离心管中。 11．加750ul异丙醇充分摇匀沉淀DNA。 12．8000rpm 离心3分钟沉淀DNA。
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13．倒掉上清液，加入1ml 70％冷乙醇指弹洗涤DNA沉淀。
14．12000 rpm 离心8分钟充分沉淀DNA,倒掉上清液，室温自然干燥DNA沉淀。 15．待DNA沉淀完全干燥，加200ul TE液溶解DNA，再加入2ul RNA酶，室温30min后放入4℃保存备用。若要长期保存，放入-20℃冰箱冻存。
16．配制0.8%琼脂糖胶（方法与实验一相同），取5ul DNA样品与适量溴酚篮（1ul）混匀后电泳。
5.电泳检测
1）1%琼脂糖凝胶的配制
称取1g琼脂糖，置于三角瓶中，加入100ml TBE工作液，混匀后将该三角瓶置于微波炉加热煮沸10sec，加入20ul（约一滴）溴化乙锭（1mg/mL），混匀后室温降温至50℃左右。用挡板封住胶板，在固定位置放上梳子，将凝胶缓慢倒入胶板，室温下静止30min左右，待凝胶凝固后，轻轻拔出梳子。拔掉挡板，将凝胶板放入含有TBE缓冲液的电泳槽中。 1）点样
取5ul提取的植物和动物基因组DNA，分别与适量的溴酚篮（样品的1/5）混匀后，点入凝胶孔内。同时将分子量标记5ul（DGL2000）也点入凝胶第一孔位置内。
注：DGL2000分子量标记分别是：2000bp, 1600bp, 1000bp, 750bp, 500bp, 250bp, 100bp。 2）电泳
接通电源后，将电泳仪的电压调至150V，电泳2小时左右，溴酚篮移动距点样孔3cm左右，停止电泳。 3）观察和拍照
将凝胶从凝胶板上取下，放到紫外观察箱中，打开紫外观察灯254nm，可见到大分子量的植物和动物基因组DNA。凝胶DNA的拍照采用凝胶成像仪（在植病重点实验室进行）。
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