amy土壤整理(采样、测定,微生物)(4)

2020-04-15 00:14

液1mL含100μg K。 仪器

原子吸收分光光度计(发射部分)或火焰光度计。 振荡机。 实验方法

(1)待测液的制备:称取通过2mm筛孔的风干土样5.0000g(精确至0.0001g)置于200mL锥形瓶中,加入50mL乙酸铵浸提剂,加塞,立即放在振荡机上振荡30min。用慢速滤纸过滤于100mL容量瓶中,用乙酸铵浸提剂洗涤,再以乙酸铵浸提剂稀释至刻度,摇匀。同时做空白试验。

(2)测定发射强度:在选定工作条件的原子吸收分光光度计(发射部分)或火焰光度计上,于766.5nm波长处(火焰光度计用钾滤光片)测定发射强度,从工作曲线上查得相应的钾量。

(3)工作曲线:分别取0、200、500、1000、2000、4000μg钾标准溶液置于100mL容量瓶中,用乙酸铵浸提剂稀释至刻度,摇匀,在相同条件下测定发射强度,绘制工作曲线。 结果计算

按下式计算土壤速效钾量:式中:

WK——速效钾量,mg/kg;

C——从工作曲线上查得速效钾量,μg; m——风干土样质量,g;

K——风干土样换算成烘干土样的水分换算系数。

5.2.全钾:NaOH熔融,火焰光度法(FP640型火焰光度计)

试剂

(1)氢氧化钠。 (2)盐酸溶液,1+1。

(3)硫酸溶液:4.5mol/L,量取250mL硫酸(ρ 1.84g/mL),缓慢加入750mL

水中,再加水至1000mL。

(4) 钾标准溶液:称取在105℃烘2h的0.1907g氯化钾(KCl),精确至0.0001g,溶于水中,再加水稀释至1000mL,此溶液1mL含100μg K。 仪器

原子吸收分光光度计(发射部分)或火焰光度计。 银坩埚。 实验方法

(1)待测液的制备:称取通过0.149mm筛孔的风干土样0.2000g(精确至0.0001g)置于银坩埚中,加入2g固体氢氧化钠。将银坩埚放入高温炉内,由室温升至300℃,保温10min;再升高温度至750℃,保温15min,取出冷却。在银坩埚中加入10mL水,微热使熔块溶解,然后将溶液移入50mL容量瓶中,用热水和2mL 4.5mol/L硫酸溶液多次洗涤银坩埚并倒入容量瓶内,溶液体积控制约40mL。加入5滴盐酸(1+1)溶液和5mL 4.5mol/L硫酸溶液,摇动后冷却至室温,再加水稀释至刻度,摇匀后静置澄清或用慢速滤纸过滤,溶液作测钾用。同时做空白试验。

(2)测定发射强度:吸取5.00mL~10.00mL溶液置于50mL容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。直接在选定工作条件的原子吸收分光光度计(发射部分)或火焰光度计上,于766.5nm波长处(火焰光度计用钾滤光片)测定发射强度,从工作曲线上查得相应的钾量。

(3) 工作曲线:分别取0、250、500、1000、2000、3000μg钾标准溶液置于50mL容量瓶中,加入与待测液中等量的氢氧化钠和硫酸量(如吸取5.00mL待测液,应加入0.2g氢氧化钠和0.7mL 4.5mol/L硫酸溶液),再加水稀释至刻度,摇匀,在相同工作条件下测定发射强度,绘制工作曲线。 结果计算

按下式计算土壤全钾量:式中:

WK=全钾量,g/kg;

C——从工作曲线上查得全钾量,μg;

t——分取倍数(溶液总体积50mL/吸取溶液体积mL); m——风干土样质量,g;

K——风干土样换算成烘干土样的水分换算系数。

6、土壤酶活性的测定 1.蔗糖酶活性的测定

试剂

(1)3,5-二硝基水杨酸溶液:称0.5 g 3,5-二硝基水杨酸,溶于20 ml 2 N氢氧化钠和50 ml 水中,再加30 g酒石酸钾钠,用水稀释至100 ml。

(2)pH 5.5 磷酸缓冲液:1/15 M 磷酸氢二钠(11.867 g Na2HPO4·2H2O溶于1 L蒸馏水中)0.5 ml加1/15 M磷酸二氢钾(9.078 g KH2PO4 溶于1 L蒸馏水中)9.5 ml即成。 (3)8 %蔗糖溶液。 (4)甲苯。

(5)葡萄糖标准液:将葡萄糖先在50-58 ℃条件下,真空干燥至恒重。然后取500 mg溶于100 ml苯甲酸饱和溶液中(5mg还原糖/ml)即成标准葡萄糖溶液。再用标准液制成1ml含0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg葡萄糖的工作溶液。 实验方法

(1)操作步骤:称5 g风干土,置于50 ml三角瓶中,注入15 ml 8 %蔗糖溶液,5 ml pH 5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37 ℃下培养24 h。到时取出,迅速过滤。从中吸取滤液1ml,注入50 ml容量瓶中,加3 ml 3,5-二硝基水杨酸,并在沸腾的水浴锅中加热5 min,随即将容量瓶移至自来水流下冷却3 min。最后用蒸馏水稀释至50 ml,并在分光光度计上于波长508 nm处进行比色。

(2)标准曲线绘制:取1 ml不同浓度的葡萄糖工作液,并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色,比色后以光密度值为纵坐标,葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。 计算公式:

蔗糖酶活性以24 h后1 g土壤中葡萄糖的毫克数表示。

葡萄糖(mg/g)=c×50×ts/m

式中:c—标准曲线上查得的酚浓度,mg/ml; 50—显色液体积,ml; ts—分取倍数;

m—土壤质量,g。

2.蛋白酶活性的测定

试剂

(1)1 %白明胶溶液(用pH 7.4的磷酸盐缓冲液配制); (2)甲苯;

(3)磷酸盐缓冲液(pH 7.4); (4)0.1 N H2SO4; (5)20% Na2SO4;

(6)2%茚三酮溶液:将2 g茚三酮溶于100 ml丙酮,然后将95 ml该溶液与1 ml CH3COOH和4 ml水混合制成工作液(该工作液不稳定,只能在使用前配制); (7)甘氨酸标准液:浓度为1 ml含100 μg甘氨酸的水溶液:0.1 g甘氨酸溶解于1 L蒸馏水中。再将该标液稀释10倍得10 μg甘氨酸/ml溶液的甘氨酸工作液。 实验方法

(1)操作步骤:取2 g风干土样置于50 ml容量瓶中,加入10 ml1%用pH 7.4磷酸盐缓冲溶液配制的白明胶溶液和0.5 ml甲苯;在30 ℃恒温箱中培养24 h;培养结束后,将瓶中内溶物过滤;取2 ml滤液置于试管中,加入0.5 ml 0.1 N硫酸和3 ml 20%硫酸钠以沉淀蛋白质,然后滤入50 ml容量瓶,并加入1 ml 2%茚三酮溶液;将混合物仔细摇荡,并在煮沸的水浴中加热10 min;将获得的着色溶液用蒸馏水稀释定容至刻度线;最后在560 nm处进行比色。

(2)标准曲线绘制:分别吸取0、1、3、5、7、9、11 ml甘氨酸工作液于50 ml容量瓶中即获得甘氨酸浓度分别为0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2 ug/ml的标准溶液梯度,然后加入1 ml 2%茚三酮溶液。冲洗瓶颈后将混合物仔细摇荡,并在煮沸的水浴中加热10 min。将获得的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。在560 nm

处进行比色,最后绘制标准曲线。 计算公式:

土壤蛋白酶的活性,以24 h后1 g土壤中甘氨酸的微克数表示。

甘氨酸(ug/g)= c×50×ts/m

式中:c—标准曲线上查得的甘氨酸浓度,ug/ml; 50—显色液体积,ml; ts—分取倍数; m—土壤质量,g。

3.碱性磷酸酶活性的测定

试剂

(1)1 mg/ml对硝基苯磷酸二钠(用缓冲液配制); (2)pH 9.4硼酸盐缓冲液; (3)0.5 mol/L CaCl2; (4)0.5 mol/L NaOH; (5)甲苯;

(6)对硝基苯酚标准液:取1 g对硝基苯酚溶于水,稀释至1 L(1 mg/ml)取1 ml标准液转入100 ml容量瓶中,稀释至刻度,仔细混匀。 实验方法

(1)操作步骤:取鲜土0.5 g,加0.2 ml甲苯浸提土壤中的磷酸酶,再加5 ml含对硝基苯磷酸二钠1 mg/ml的反应底物溶液(缓冲液),放入30 ℃培养箱中培养1 h,然后用4 ml 0.5 mol/L NaOH终止酶反应,再加1 ml 0.5 mol/ L CaCl2充分混匀,用滤纸过滤。滤液在410 nm处比色。

(2)标准曲线的绘制:分别取1、2、3、4、5 ml溶液(相当于10、20、30、40、50 ug的对硝基苯酚)置于瓶中,用水稀释至5 ml,加1 ml 0.5 mol/L CaCl2和4 ml 0.5 mol/L NaOH,在410 nm比色绘制标准曲线。 计算公式:

磷酸酶活性,以24 h后1 g土壤中释放处的酚的毫克数表示。

酚(mg/g)=c×10×ts/1000m


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