7.2 未使用完的感染性生物材料销毁或放入BSL-3级实验室－70℃冰箱，并如实填写操作和处理记录。
7.3 实验区内的污染材料高压处理（121℃高压20min）后，再进行集中高压处理。
附件3
埃博拉病毒核蛋白抗原检测方法（双抗体夹心法ELISA）
1 目的
双抗体夹心法ELISA检测血清中埃博拉病毒核蛋白抗原。 2 适用范围
适用于人血清或血浆中埃博拉病毒核蛋白抗原的检测。 3 实验前准备
3.1 核对被检样品（血清或血浆）患者的姓名、编号及检测项目等。 3.2检测前将60℃ 1小时灭活的待测样品置于BSL-3实验室生物安全柜内。 4 检测项目
本方法检测项目为检测血清或血浆中埃博拉病毒核蛋白抗原。 5 检测仪器设备和材料
加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪、病毒病所出血热室自制埃博拉病毒抗原检测试剂盒（双抗体夹心法ELISA）。
6操作步骤
6.1 将试剂盒在冰箱中取出，放置室温平衡30分钟，使用前将试剂轻轻震荡混匀。
6.2 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释注入洗涤瓶或洗板机的桶内。 6.3 编号：将样品对应微孔板编号，每板设阴性对照3孔，模拟阳性对照2孔和空白对照1孔。
6.4 加稀释液：每孔加稀释液50μL，空白孔除外。
6.5 加样：分别在相应孔加入待测样品或阴阳性对照各50μL，空白孔除外。 6.6 温育：用封板膜封板后，置37℃温育60分钟。 6.7 每孔加酶标试剂50μL，空白孔除外，轻轻震荡混匀。 6.8 温育：用封板膜封板后，置37℃温育30分钟。 6.9 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍。
6.10显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分
钟。
6.11测定：每孔加终止液50μL，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议使用双波长450nm/600-650nm检测），用空白孔调零后测定各孔A值。
7 结果判定
7.1 临界值计算：临界值=0.10+阴性对照孔A值均值（阴性对照孔A值低于0.05者以0.05计算）。
7.2 阴性对照的正常值范围：阴性对照孔A≤0.1。 7.3 阳性对照的正常值范围：0.8≤A≤1.5.
7.4阳性判定：样品A值≥临界值者为埃博拉病毒抗原阳性。 7.5阴性判定：样品A值＜临界值者为埃博拉病毒抗原阴性。 8 意义
结合临床信息，阳性结果可以诊断为埃博拉病毒感染，但阴性结果并不排除埃博拉病毒感染的可能。
9 清场与消毒
9.1 操作结束后，及时清理生物安全柜内的物品，用0.5%次氯酸钠溶液和75%乙醇擦试外表面后，移出生物安全柜放入冰箱中。
9.2 将未使用完的感染性生物材料按销毁或放入BSL-3级实验室－70℃冰箱，并如实填写操作和处理记录。
9.3 将实验区内的污染材料按高压处理（121℃高压20min）后，再进行集中高压处理。
附件4
埃博拉病毒IgM抗体检测（抗体捕捉法ELISA）
1 目的
检测埃博拉病毒特异性IgM抗体。 2 适用范围
适用于人血清或血浆中埃博拉病毒特异性IgM抗体的检测。 3 样品接收和准备
（1）核对被检样品（血清或血浆）患者的姓名、编号及检测项目等。 （2）检测前应将60℃ 1小时热灭活的待测样品置于BSL-3实验室生物安全柜内。 4 检测项目
本方法检测项目为检测血清或血浆中病毒特异性IgM抗体 5 检测仪器设备和材料
加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪、埃博拉病毒IgM抗体检测试剂盒，或实验室自备材料：
（1）抗原：
阳性抗原标记物：酶标原核表达埃博拉病毒核蛋白。 阴性抗原标记物：酶标原核表达汉坦病毒核蛋白。 （2）抗人IgM（μ链）单克隆抗体或多克隆抗体； （3）汉坦病毒IgM阳性、阴性对照血清；
（4）辣根过氧化物酶标记埃博拉病毒单克隆抗体； （5）缓冲液：
洗涤液：pH7.4 PBS－T（0.05％吐温－20）； 稀释液：pH7.4 PBS（5％牛血清）；
封闭液：pH9.6 碳酸缓冲液（1％牛血清白蛋白）； （6）显色液：A/B液 （7）终止液：4N H2SO4
6 检测原理
本方法采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶标记的病毒抗原，用以检测埃博拉病毒特异性IgM抗体。适用于埃博拉出血热的早期诊断及其它实验性研究。
7检测步骤：
（1）用稀释液按效价稀释抗人μ链单克隆抗体，100μl/孔，加盖，4℃过夜； （2）弃去抗人μ链，用洗涤液重复洗3次，加封闭液，100μl/孔，置37℃水浴孵育2小时；
（3）弃封闭液，用洗涤液重复洗3次。
（4）将待检血清1:100稀释液，加入酶标板孔中，100μl/孔，同时将1:100稀释的阳性血清、阴性血清对照分别加入，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小时；
（5）弃去血清，用洗涤液重复洗3次，分别加入酶标埃博拉病毒抗原及汉坦病毒抗原，100μl/孔，4℃过夜；
（6）弃抗原，用洗涤液重复洗3次，于各反应孔内加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分钟；
（7）加终止液于每反应孔，一滴/孔。 8 结果判断：
8.1 临界值计算：临界值=0.10+阴性对照孔A值均值（阴性对照孔A值低于0.05者以0.05计算）。
8.2 阴性对照的正常值范围：阴性对照孔A≤0.1。 8.3 汉坦病毒阳性对照的正常值范围：0.8≤A≤1.5.
8.4阳性判定：样品A值≥临界值者为埃博拉病毒IgM抗体阳性。 8.5阴性判定：样品A值＜临界值者为埃博拉病毒IgM抗体阴性。 阳性结果，提示患者埃博拉病毒感染，用于埃博拉出血热早期诊断。 9 清场与消毒
9.1 操作结束后，及时清理生物安全柜内的物品，用0.5%次氯酸钠溶液和75%乙醇擦试外表面后，移出生物安全柜放入冰箱中。
9.2 未使用完的感染性生物材料销毁或放入BSL-3级实验室－70℃冰箱，并如实