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（二）PCR的基本反应步骤
1、DNA模板的变性
将待扩增DNA加热到950C左右，使双链DNA解开成为单链（即：使模板DNA或延伸后的双链DNA发生热变性 ），并游离于反应体系中作为模板 2、模板与引物的结合（退火或复性） 将体系温度降至合适温度（500C左右），使加入的引物与模板DNA两端（3ˊ端）碱基序列互补结合。（由于加入的引物量远多于模板量，所以引物与模板的结合比例远大于模板自身的复性）； 3、引物延伸
将体系温度升到720C左右，Taq聚合酶催化dNTP按碱基互补原则连接在DNA引物3ˊ端，使引物延伸，形成两条与模板互补的新链.
（三）PCR技术的优缺点
1、PCR技术优点
特异性强、灵敏度高、操作简便、省时，对样本质量要求不高，能快速、特异地扩增任何DNA片断。
2、PCR缺点
由于高灵敏度，使易出现假阴性或假阳性结果。 （四）PCR产物分析
1、凝胶电泳分析法 2、点杂交分析法
① 将扩增产物直接固定在膜上，每一个探针制备一张膜，然后用不同的特异
探针进行杂交； ② 将不同的探针固定在膜上，再用有标记的PCR产物 与之杂交。
（五）PCR的主要用途 ? ? ? ? ?
目的基因的克隆 基因的体外突变 DNA和RNA的微量分析 DNA序列测定 基因突变分析
四、生物芯片技术
1、生物芯片 ：主要指通过平面微细加工技术在固体芯片表面构建的微流体分析单元和系统，以实现对细胞、蛋白质、核酸以及其它生物组分的准确、快速、大信息量的检测。 2、基因芯片： 技术是通过微阵列技术, 将高密度DNA片段阵列通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面，以荧光标记的DNA探针，借助碱基互补杂交原理，进行大量的基因表达及监测等方面研究的最新革命性技术。
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五、基因克隆技术
（一）表型克隆
1、从对一种致病基因的功能的了解出发，克隆该致病基因。 2、克隆方式
① 利用特异性抗体筛选表达型cDNA文库；
② 根据已知的部分氨基酸序列合成寡核苷酸作探针，筛选cDNA文库
（二）定位克隆
1、从一种致病基因的染色体定位出发逐步缩小范围，最后克隆该基因。 2、系统的定位克隆工作
① 遗传学分析(确定致病基因染色体定位)交换分析、连锁不平衡分析
② 分子生物学分析染色体异常(缺失、易位等)分析、基因文库的筛选与基因克隆。
六、基因转移技术
1、基因转染：目的基因转导入体外培养的细胞。 2、转基因技术：采用基因转移技术使目的基因整合入受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导入动物子宫，使之发育成个体；目的基因导入受精卵，在植入子宫，发育成胚胎/个体。 3、核转移技术：即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone) 。
七、基因敲除技术 基因剔除技术/基因靶向：灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。
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