细胞生物学实验指导(12生工)(4)

2019-01-26 17:05

一、实验目的:

1、了解诱导小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理;2、观察细胞吞噬作用的基本过程;3、掌握左手抓小鼠,右手小鼠腹腔注射给药方法;4、掌握颈椎脱臼处死方法;掌握抽取腹腔液的方法。 二、实验原理:

单细胞动物通过细胞吞噬作用摄取营养物质。高等动物的巨噬细胞和嗜中性粒细胞,专司吞噬作用,成为非特异性免疫功能的重要组成部分。当机体受到异物进入时,吞噬细胞由于具有趋化性,产生变形运动,主动向异物聚集。异物首先被吸附在细胞表面,细胞膜向内凹陷,并伸出伪足包围异物,发生内吞作用形成吞噬体,继而在细胞内与溶酶体融合,将异物消化分解,最后将不能消化的残渣排出细胞外。 三、实验器材与试剂

1、材料:

小白鼠;1%鸡红细胞悬液[取鸡血1 ml,放入4 mlAlsever溶液瓶中混匀于4℃下可保存一周。使用前加入0.85%生理盐水离心(1500r/min 10min)洗涤二次,再用0.85%生理盐水配成1%浓度悬液]。

2、器材:显微镜、注射器、解剖盘、剪刀、镊子、吸管、玻片。 3、试剂: 0.85%生理盐水;

Alsever溶液:葡萄糖 2.05g; 柠檬酸钠0.89g; 柠檬酸0.05g 氯化钠0.42g;蒸馏水 100ml。调PH至7.2,过滤灭菌或高压灭菌.

2%淀粉肉汤悬浮液(含台盼蓝染液):牛肉膏0.3g;蛋白胨1.0g;氯化钠0.5g;蒸馏水100ml。加热后加入可溶性淀粉6.0g,促使溶解,再煮沸灭菌,置4℃冰箱保存。用时水浴融化,加入适量4%台盼蓝混匀,使呈蓝色。 四、实验步骤与方法

1、实验前1~2天,给小白鼠腹腔注射2%淀粉肉汤悬浮液1ml。

2、实验时,每组取一只经上述处理过的小鼠,腹腔注射1%鸡红细胞悬液

1ml,轻轻揉小鼠腹腔,使悬液分散。

3、20min后,用颈椎脱臼法处死小鼠,迅速打开腹腔,用带针头的注射器贴

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腹股沟处插入抽取腹腔液。

4、滴1滴腹腔液于盖玻片上,制成临时装片,镜检。 观察结果

1、高倍镜下是否看到许多体积较大的圆形或形态不规则的巨噬细胞,胞质中是否观察到红细胞?(高倍暗视野下观察)

2、变换视野,观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞过程的不同阶段情况。 作业:绘制小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程图。

思考题:为什么要事先向小鼠腹腔注射淀粉肉汤悬浮液?吞噬细胞的变形运动及吞噬作用的生物学机理是什么?

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