13．关于米氏常数Km的说法，哪个是正确的？
A、饱和底物浓度时的速度 B、在一定酶浓度下，最大速度的一半 C、饱和底物浓度的一半 D、速度达最大速度一半时的底物浓度 14．酶的竞争性抑制剂具有下列哪种动力学效应：
A、Vm不变，Km增大 B、Vm不变，Km减小 C、Vm增大，Km不变 D、Vm减小，K m不变 15．下面关于酶的描述，哪一项不正确：
A、所有的酶都是蛋白质 B、酶是生物催化剂 C、酶具有专一性 D、酶是在细胞内合成的，但也可以在细胞外发挥催化功能 16．催化下列反应的酶属于哪一大类：
1，6—二磷酸果糖 3-磷酸甘油醛+磷酸二羟丙酮
A、水解酶 B、裂解酶 C、氧化还原酶 D、转移酶 17．下列哪一项不是辅酶的功能：
A、传递氢 B、转移基团
C、决定酶的专一性 D、某些物质分解代谢时的载体 18．下列关于酶活性中心的描述，哪一项是错误的：
A、活性中心是酶分子中直接与底物结合，并发挥催化功能的部位
B、活性中心的基团按功能可分为两类，一类是结合基团，一类是催化基团 C、酶活性中心的基团可以是同一条肽链但在一级结构上相距很远的基团 D、不同肽链上的有关基团不能构成该酶的活性中心 19．下列哪一种抑制剂不是瑚珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂：
A、乙二酸 B、丙二酸 C、丁二酸 D、碘乙酸 20．酶原激活的实质是：
A、激活剂与酶结合使酶激活 B、酶蛋白的别构效应 C、酶原分子空间构象发生了变化而一级结构不变
D、酶原分子一级结构发生改变从而形成或暴露出活性中心 21．酶原激活的生理意义是：
A、加速代谢 B、恢复酶活性 C、生物自我保护的方式 D、保护酶的方式 22．一个简单的米氏酶催化反应，当[S]< A、反应速度最大 B、底物浓度与反应速度成正比 C、增加酶浓度，反应速度显著变大 D、[S]浓度增加，Km值也随之变大 23．下列哪一项不能加速酶促反应速度： A、底物浓集在酶活性中心 B、使底物的化学键有适当方向 C、升高反应的活化能 D、提供酸性或碱性侧链基团作为质子供体或受体 24．关于酶的抑制剂的叙述正确的是： A、酶的抑制剂中一部分是酶的变性剂 B、酶的抑制剂只与活性中心上的基团结合 C、酶的抑制剂均能使酶促反应速度下降 D、酶的抑制剂一般是大分子物质 25．胰蛋白酶原经肠激酶作用后切下六肽，使其形成有活性的酶，这一步骤是: A、诱导契合 B、酶原激活 C、反馈调节 D、同促效应 26．酶的比活力是指： A、任何纯酶的活力与其粗酶的活力比 B、每毫克蛋白的酶活力单位数 C、每毫升反应混合液的活力单位 D、以某种酶的活力作为1来表示其他酶的相对活力 27．泛酸是下列哪一过程的辅酶组成成分： A、脱羧作用 B、乙酰化作用 C、脱氢作用 D、氧化作用 28．下列哪一种维生素是辅酶A的前体： A、核黄素 B、泛酸 C、钴胺素 D、吡哆胺 29．下列那种维生素衍生出了TPP: A、维生素B1 B、维生素B2 C、维生素B5 D、生物素 30．某一酶 的动力学资料如下图，它的Km为： 6 1/V 4 -3 -2 -1 0 1 2 3 1/[S] A、2 B、3 C、0.33 D、0.5 三、是非题1.× 2.× 3.√ 4.√ 5.√ 6.× 7.√ 8.√ 9.× 10.× 11.√ 12.× 13.× 14.√ 15.× 16.√ 17.× 1．测定酶活力时，底物的浓度不必大于酶的浓度。 2．酶促反应的初速度与底物浓度无关。 3．当底物处于饱和水平时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。 4．酶有几种底物时，其Km值也不相同。 5．某些调节酶的V---S的S形曲线表明，酶与少量底物的结合增加 了酶对后续 底物的亲和力。 6．在非竟争性抑制剂存在下，加入足够量的底物，酶促反应能够达到正常的Vm.。 7．如果有一个合适的酶存在，达到过渡态所需的活化能就减少。 8．T.Cech从自我剪切的RNA中发现了有催化活性的RNA,称之为核酶。 9．同工酶指功能相同、结构相同的一类酶。 10．最适温度是酶特征的物理常数，它与作用时间长短有关。 11．酶促反应中，酶饱和现象是普遍存在的。 12．转氨酶 的辅酶是吡哆醛。 13．酶之所以有高的催化效率是因为它可提高反应活化能。 14．对于多酶体系，正调节物一般是别构酶 的底物，负调节物一般是别构酶的直接产物或代谢序列的最终产物 15．对共价调节酶进行共价修饰是由非酶蛋白进行的。 16．反竞争性抑制作用的特点是Km值变小，Vm也变小。 17．别构酶调节机制中的齐变模型更能解释负协同效应。 四、计算题 4.1．某底物在溶液中的浓度为0.001mmol,而其活性中心的浓度的为100mmol,求活性中心 -5 的浓度比溶液中的的浓度高多少倍？4×10mol／sec 2．酶作用于某底物的米氏常数为0.005mol,其反应速度分别为最大反应速度 90%,50%,10%时，底物浓度应 -8 为多少？ (2)5×10mol 3．催化焦磷酸水解的酶的分子量为120 000 ,由六个相同的亚基组成，纯酶的比活力为3600U/mg酶，它的一个活力单位（U）规定为：15分钟内在37℃标准条件下水解10微摩尔焦磷酸的酶量。 求：（1）每mg酶在每秒钟 内水解多少摩尔底物。（2）每mg酶中有多少摩尔的活性中心？（假设每个亚基上有一个活性中心）。(3)酶的转换系数 2 (3)8×10／sec(即摩尔焦磷酸·秒-1／摩尔酶 4．称取25mg的蛋白酶粉配制成25ml酶液，从中取出0.1ml,以酪蛋白 为底物用Folin-酚比色法测定酶 活力，结果表明每小时 产生1500μg酪氨酸。另取2ml酶液，用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2mg。若以每分钟产生1μg酪氨酸的量为1个活力单位计算，根据以上数据，求：A、1ml酶液中蛋白的含量及活力单位。 B .1g酶制剂的总蛋白含量及总活力。 C . 酶比活力 5 A、0.625mg 蛋白质, 250单位， B、0.625g, 2.5×10单位 C、 400单位/毫克蛋白 -5-4-4-4 5．某酶的Km=4.7×10mol/L；Vmax=22μmol/min。当[S]=2×10mol/L，[I]=5×10mol/L，Ki=3×10mol/L时，求：I为竞争性抑制和非竞争性抑制时，V分别是多少？ 竞争性：V=13.5(mol/L)/min；抑制程度为：24.1% 非竞争性：V=6.67(μmol/L)min；抑制程度为：62.5% 五、名词解释 1.酶的活性中心 酶分子中氨基酸残基的侧链有不同的化学组成。其中一些与酶的活性密切相关的化学基团称作酶的必需基团（essential group）。这些必需基团在一级结构上可能相距很远，但在空间结构上彼此靠近，组成具有特定空间结构的区域，能和底物特异结合并将底物转化为产物。这一区域称为酶的活性中心（active center）或活性部位（active site） 2.酶的专一性 酶对所作用的底物有严格的选择性。一种酶仅能作用于一种物质，或一类分子结构相似的物质，促其进行一定的化学反应，产生一定的反应产物，这种选择性作用称为酶的专一性。 酶的专一性是指酶对底物及其催化反应的严格选择性。通常酶只能催化一种化学反应或一类相似的反应，不同的酶具有不同程度的专一性，酶的专一性可分为三种类型：绝对专一性、相对专一性、立体专一性。 3.竞争性抑制作用 通过增加底物浓度可以逆转的一种酶抑制类型。一个竞争性抑制剂通常与正常的底物或配体竞争同一个酶的结合部位。这种抑制使得Km增大，而Vmax不变。 4.非竞争性抑制作用 抑制剂不仅与游离酶结合，也可以与酶-底物复合物结合的一种酶促反应抑制作用。这种抑制使得Vmax变小，但Km不变 非竞争性抑制作用：抑制剂不能与游离酶结合，但可与ES复合物结合并阻止产物生成，使酶的催化活性降低 特点为：a.抑制剂与底物可同时与酶的不同部位结合；b.必须有底物存在，抑制剂才能对酶产生抑制作用；c.动力学参数。 5.别构酶 一种其活性受到结合在活性部位以外部位的其它分子调节的酶。又称为变构酶，是一类重要的调节酶。在代谢反应中催化第一步反应的酶或交叉处反应的酶多为别构酶。别构酶均受代谢终产物的反馈抑制。 6.别构效应 别构效应，（allosteric effect），是某种不直接涉及蛋白质活性的物质，结合于蛋白质活性部位以外的其他部位（别构部位），引起蛋白质分子的构象变化，而导致蛋白质活性改变的现象。别构部位的概念是1963年由法国科学家J．莫诺等提出来的。影响蛋白质活性的物质称为别构配体或别构效应物。该物质作用于蛋白质的某些部位而发生的相互影响称为协同性。抑制蛋白质活力的现象称为负协同性，该物质称为负效应物。增加活力的现象称为正协同性，该物质称为正效应物。受别构效应调节的蛋白质称为别构蛋白质，如果是酶，则称为别构酶。 7.同工酶 同工酶（isozyme，isoenzyme）广义是指生物体内催化相同反应而分子结构不同的酶。按照国际生化联合会（IUB）所属生化命名委员会的建议，则只把其中因编码基因不同而产生的多种分子结构的酶称为同工酶。最典型的同工酶是乳酸脱氢酶（LDH）同工酶。 8.酶的比活力 1、在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。 2、比活力(性)(Specific Activity)是酶纯度的量度,即指:单位重量的蛋白质中所具有酶的活力单位数,一般用IU/mg蛋白质来表示.一 般来说,酶的比活力越高,酶越纯.。 3、比活力 为每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数，一般用酶活力单位/mg蛋白质表示。酶的比活力在酶学研究中用来衡量酶的纯度，对于同一种酶来说，比活力越大，酶的纯度越高。利用比活力的大小可以用来比较酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力，是表示酶的纯度高低的一个重要指标。 9.酶原激活 某些酶在细胞内合成或初分泌时没有活性，这些没有活性的酶的前身称为酶原(zymogen),使酶原转变为有活性酶的作用称为酶原激活(zymogen activation)。 10.寡聚酶 寡聚酶由2个或多个相同或不相同亚基组成的酶，称为寡聚酶。 单独的亚基一般无活性，必需相互结合才有活性相对分子质量大于35，000。相当数量的寡聚酶是调节酶，其活性可受各种形式的灵活调节，对代谢过程起重要的调控作用。如糖代谢过程中的很多酶均属于寡聚酶。 11.酶的转换数 酶的转换数（turnover number ）表示酶的催化中心的活性，它是指单位时间（如每秒）内每一催化中心（或活性中心）所能转化的底物分子数，或每摩尔酶活性中心单位时间转换底物的摩尔数。米氏方程推导中的k3即为转换数（ES→E+P，箭头上以k3表示）。当底物浓度过量时，因为Vmax=k3[E0]，故此转换数可用以下公式进行计算： 转换数=k3=Vmax/[E0] 12.辅酶和辅基 辅酶（coenzyme）是一类可以将化学基团从一个酶转移到另一个酶上的有机小分子，与酶较为松散地结合，对于特定酶的活性发挥是必要的。有许多维他命及其衍生物，如核黄素、硫胺素和叶酸，都属于辅酶。这些化合物无法由人体合成，必须通过饮食补充。不同的辅酶能够携带的化学基团也不同：NAD或NADP+携带氢离子，辅酶A携带乙酰基，叶酸携带甲酰基，S-腺苷基蛋氨酸也可携带甲酰基。辅基是与酶蛋白共价结合的金属离子或一类有机化合物 13.诱导契合 为说明底物与酶结合的特性，在锁钥学说的基础上提出的一种学说。底物与酶活性部位结合，会引起酶发生构象变化，使两者相互契合，从而发挥催化功能。对于它所作用的底物有着严格的选择,它只能催化一定结构或者一些结构近似的化合物,使这些化合物发生生物化学反应。有的科学家提出,酶和底物结合时,底物的结构和酶的活动中心的结构十分吻合,就好像一把钥匙配一把锁一样。酶的这种互补形状,使酶只能与对应的化合物契合,从而排斥了那些形状、大小不适合的化合物,这就是“锁和钥匙学说”。科学家后来发现,当底物与酶结合时,酶分子上的某些基团常常发生明显的变化。另外,酶常常能够催化同一个生化反应中正逆两个方向的反应。因此,“锁和钥匙学说”把酶的结构看成是固定不变的,这是不符合实际的。于是,有的科学家又提出,酶并不是事先就以一种与底物互补的形状存在,而是在受到诱导之后才形成互补的形状。这种方式如同一只手伸进手套之后,才诱导手套的形状发生变化一样。底物一旦结合上去,就能诱导酶蛋白的构像发生相应的变化,从而使酶和底物契合而形成酶-底物络合物,这就是“诱导契合学说”。后来,科学家对羧肽酶等进行了X射线衍射研究,研究的结果有力地支持了这个学说。 14.全酶 具有催化活性的酶，包括所有的必需的亚基、辅基和其它的辅助因子。 15.别构酶的序变模型及齐变模型 别构酶 当某些化合物与酶分子中的别构部位可逆地结合后，酶分子的构象发生改变，使酶活性部位对底物的结合与催化作用受到影响，从而调节酶促反应速度及代谢过程，这种效应称为别构效应。具有别构效应的酶称为别构酶。别构酶常是代谢途径中催化第一步反应或处于代谢途径分支点上的一类调节酶，大多能被代谢最终产物所抑制，对代谢调控起重要作用。齐变模型（MWC模型）主张别构酶所有的亚基或者全部是坚固紧密的，不利于结合底物的“T”状态，或者全部是松散的，利于结合底物的“R”状态。这两种状态间的转变对每个亚基都是同步的，齐步发生的，“T”状态中的亚基的排列是对称的，变为R状态后，蛋白亚基的排列仍然是对称的。 正调节物（如底物）与负调节物的浓度比例决定别构酶究竟处于何种状态。当无小分子调节物存在时，平衡趋向于“T”状态；当有少量底物时，平衡即向R状态移动，当构象转变为“R”状态后，又进一步增加了对底物的亲和性，给出了S形动力学曲线。目前认为，齐变模型不适用于负协调效应。 序变模型（KNF模型）和齐变模型是为了了解酶作用机制提出的两种主要模型。其要点如下：一个配体可以诱导它要结合的亚基的三级结构的变化。这个亚基-配体复合体又能够改变相邻亚基的构象。这一模型特别强调对于配体只有一种形状是亲和力最高的，但与齐变模型不同的是在具有部分饱和的一个寡聚分子中允许存在着高亲和力和低亲和力的亚基。 任何亚基都只有两种构象状态，即R和T；结合底物后，改变结合了底物的亚基的构象，成为R态，而未被底物结合的亚基构象并没有发生显著的变化，仍处于T态；一个亚基中底物结合引起的构象变化会使同 一酶分子中另一亚基对底物的亲和力增加或减少。 16.固化酶 全称；泰然生物催化酶，是土壤固化剂，生产高科技液态复合酶制品，一种生物高科技产品 17.多酶体系 指催化机体内的一些连续反应的酶互相联系在一起，形成的反应链体系。 一般分为可溶性的、结构化的和在细胞结构上有定位关系的三种类型。 18.RNA酶 核糖核酸酶（英语：Ribonuclease，常用缩写：RNase）或称RNA酶，是一种可将RNA水解成小分子组成的核酸酶（nuclease）。可粗分为内切核糖核酸酶（endoribonuclease）与外切核糖核酸酶（exoribonuclease），这些酶分别归属于EC 2.7（磷酸化酶）与EC 3.1（水解酶）中的多个次分类。 19.过渡态 反应物体系转变成产物体系过程中,经过的能量最高状态称为过渡态(或称活化络合物)。过渡态键的状况是:旧键未完全断裂,新键未完全形成。过渡态是不稳定的,不能分离出来。过渡态和反应物的能量差(△E)称为活化能。不同的反应体系有不同的活化能,活化能愈大反应愈困难。 六、问答题 1．为什么处于低介电环境中的基团之间的反应会得到加强？可以用水减弱极性基团间的相互作用来解释。水的极性和形成氢键能力使它成为一种具有高度作用力的分子，水的介电常数非常高。它的高极性使它在离子外形成定向的溶剂层，产生自身的电场，结果就大大减弱了它所包围的离子间的静电相互作用或氢键作用。 2．影响酶高催化效率的因素及其机理是什么？为什么说咪唑基是酸碱催化中的重要基团?催化剂的催化机理都是通过降低活化能加快化学反应速率，但酶具有高效性的特性，能显著降低反应所需的活化能 影响酸碱催化反应速度的因素有两个，第一个是酸碱的强度，在这些功能基中，组氨酸咪唑基的解离常数约为6.0，这意味着由咪唑基上解离下来的质子的浓度与水中的[H+]相近，因此它在接近于生物体液pH的条件下，即在中性条件下，有一半以酸形式存在，另一半以碱形式存在。也就是说咪唑基既可以作为质子供体，又可以作为质子受体在酶反应中发挥催化作用。因此，咪唑基是催化中最有效最活泼的一个催化功能基。第二个是这种功能基供出质子或接受质子的速度，在这方面，咪唑基又是特别突出，它供出或接受质子的速度十分迅速，其半寿期小于10-10秒。而且，供出或接受质子的速度几乎相等。由于咪唑基有如此的优点，所以虽然组氨酸在大多数蛋白质中含量很少，却很重要。推测它很可能在生物进化过程中，不是作为一般的结构蛋白成分，而是被选择作为酶分子中的催化结构而存在下来的。 3．什么是别构效应？简述别构酶的结构和动力学特点及其在调节酶促反应中的作用。别构效应，（allosteric effect），是某种不直接涉及蛋白质活性的物质，结合于蛋白质活性部位以外的其他部位（别构部位），引起蛋白质分子的构象变化，而导致蛋白质活性改变的现象。 别构酶多为寡聚酶，含有两个或多个亚基。其分子中包括两个中心：一个是与底物结合、催化底物反应的活性中心；另一个是与调节物结合、调节反应速度的别构中心。两个中心可能位于同一亚基上，也可能位于不同亚基上。在后一种情况中，存在别构中心的亚基称为调节亚基。别构酶是通过酶分子本身构象变化来改变酶的活性。 4．某酶在溶液中会丧失活性，但若 此溶液中同时存在巯基乙醇可以避免酶失活，该酶应该是一种什么酶，为什么？含-SH的酶，容易氧化与其它巯基生成-S-S-,HS-CH2CH3可防止酶失活。 5．测定酶活力时为什么以初速度为准？初速度时，产物增加量与时间呈正比 6．为什么酶的最适pH不是一个物理常数？最适pH随底物种类、浓度、与缓冲液成分不同而不同 7．羧肽酶A催化甘氨酰酪氨酸水解时，其催化机制的几个 效应是什么？无共价催化。 8．同工酶作为一个重要生化指标，主要用于哪些研究领域？利用同工酶研究细胞基因、了解植物的生长发育、预测植物的杂种优势、研究植物的抗逆性等。