福建正海海洋检测技术有限公司质量文件 主题： 检测作业指导书 文件编号：ZHJCZ-011-2008 第20页 共139页 第2版 第 0次修订 颁布日期：2008年7月30日 光值位于工作曲线中部为宜，则稀释后水样浓度计算式如下： Ｐ(NO3-N)=(An-a)/b
其中An=Az-（X/n）×A(NO2-N) N为稀释倍数
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福建正海海洋检测技术有限公司质量文件 主题： 检测作业指导书 文件编号：ZHJCZ-011-2008 第21页 共139页 第2版 第 0次修订 颁布日期：2008年7月30日 无机磷检测作业指导书
1.试剂及其配制
1.1硫酸溶液：c（H2SO4）=6.0mol/L
在搅拌下将300mL硫酸（H2SO4,ρ=1.84g/mL）缓缓加到600mL水。 1.2钼酸铵溶液
溶解28g钼酸铵【（NH4）6Mo7O24·4H2O】于200mL水中。溶液变混浊时，应重配。 1.3酒石酸锑钾溶液
溶解6g酒石酸锑钾（C4H4KO7Sb·1/2H2O）于200mL水中，贮于聚乙烯瓶中。溶液变混浊时，应重配。
1.4混合溶液
搅拌下将45mL钼酸铵溶液加到200mL硫酸溶液中，加入5mL酒石酸锑钾溶液，混匀。贮于棕色玻璃瓶中。溶液变混浊时，应重配。
1.5抗坏血酸溶液
溶解20g抗坏血酸（C6H8O6）于200mL水中，盛于棕色试剂瓶或聚乙烯瓶。在4℃避光保存，可稳定1个月。
1.6磷酸盐标准贮备液
称取1.011g硝酸钾（预先在110℃烘1h，置于干燥器中冷却至室温）用少量蒸馏水溶解后，转移至1000ml容量瓶中，稀释至标线，加1.0ml三氯甲烷，混匀，浓度为140.0mg/L，有效期半年。
1.7磷酸盐标准使用液
吸取1.0ml标准贮备液于100ml容量瓶中，稀释至标线，混匀，浓度1.40mg/L。 2.绘制工作曲线
2.1量取磷酸盐标准使用溶液0，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00mL于50mL具塞量筒中，加水至50mL标线，混匀。各浓度依次为0，0.030，0.060，0.120，0.180，0.240mg/L。
2.2各加1.0mL混合溶液，1.0mL抗坏血酸溶液，混匀。显色5min后，注入5cm测定池中，以蒸馏水作参比，于882nm波长处测定其吸光值Ai。其中零浓度为标准空白吸
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福建正海海洋检测技术有限公司质量文件 主题： 检测作业指导书 文件编号：ZHJCZ-011-2008 第22页 共139页 第2版 第 0次修订 颁布日期：2008年7月30日 光值Ao。
2.3以吸光值（Ai—Ao）为纵坐标，相应的磷酸盐浓度（mg/L）为横坐标，绘制标准曲线。
3.水样测定
量取50mL经0.45um微孔滤膜过滤的水样至具塞量筒中，按绘制工作曲线步骤测定吸光值Aw。
同时量取50mL水按相同步骤测定分析空白吸光值Ab。 4.数据计算
据（Aw—Ab）值在标准曲线上查得水样的磷酸盐浓度（mg/L），或用标准曲线线性回归方程计算。将所得数据记入记录表中。
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福建正海海洋检测技术有限公司质量文件 主题： 检测作业指导书 文件编号：ZHJCZ-011-2008 第23页 共139页 第2版 第 0次修订 颁布日期：2008年7月30日 叶绿素a检测指导
1.试剂及其配制
1.1丙酮溶液（9+1）：量取900mL丙酮（CH3COCH3）与100mL水混合，保存在棕色试剂瓶中。
1.2碳酸镁悬浮液（10g/L）：称取1g碳酸镁（MgCO3），加水至100mL，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需摇匀。
1.3硅胶 2.测定步骤 2.1样品制备
量取2L～5L海水样品，加入3mL，碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜（Wharman GF/C，Φ0.47mm）或0.445um的纤维素酯微孔滤膜过滤，过滤负压不应超过50kPa。
2.2样品的提取
将过滤了的样品滤膜放入具塞离心管，加10mL丙酮溶液,摇荡，放置冰箱贮存室中14h～24h，提取叶绿素-a。若滤得样品不能及时提取，应将该滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸，置于装有硅胶的干燥器内，贮存在低于1℃的冰箱中。
2.3样品离心离心速度：（3000～4000）r/min；离心时间：10min。 3.样品测定
小心将离心的上清液注入测定池。用丙酮溶液作参比，分别在750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定吸光值。其中，750nm处的测定，用以校正提取的浊度，当1cm测定池光程的吸光值超过0.005时，提取液应重新离心。
4.记录与计算
将测得数据记入测定记录表中，分别把在波长664nm、647nm、630nm上测的吸光值减去750nm下的吸光值，得到校正后吸光值E664、E647、E630.再按下式计算叶绿素a、b、c含量。
Pchl-a=(11.85E664-1.54E647-0.08E630)×v/V·L Pchl-b=(21.03E647-5.43E664-2.66E630)×v/V·L
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福建正海海洋检测技术有限公司质量文件 主题： 检测作业指导书 文件编号：ZHJCZ-011-2008 第24页 共139页 第2版 第 0次修订 颁布日期：2008年7月30日 Pchl-c=(24.52E630-1.67E664-7.60E647)×v/V·L
式中：Pchl-a——样品中叶绿素a含量，单位为微克每升（ug/L）； Pchl-b——样品中叶绿素b含量，单位为微克每升（ug/L）； Pchl-c——样品中叶绿素c含量，单位为微克每升（ug/L）； v——样品提取液体积，单位为毫升（mL)； V——海水样品实际用量，单位为升（L）； L——测定池光程，单位为厘米（cm）。
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