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2.2 醋酸地塞米松含量测定
2.2.1 对照品溶液制备
精密称取经105℃干燥至恒重的醋酸地塞米松对照品约2.5㎎置10mL容量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，精确5mL置50mL容量瓶中用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.2.2 供试品溶液制备
取乳膏适量（约相当于醋酸地塞米松2.5㎎）精密称定，置100mL烧杯中，加无水乙醇约25mL，置80℃水浴上加热搅拌使醋酸地塞米松溶解，再置冰水浴中充分冷却，过滤，滤液置100mL容量瓶中，同法提取3次，滤液并入容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.2.3 波长选择
精密称取对照品和供试品溶液各4mL分别置于具塞10mL容量瓶在水浴上蒸干乙醇，残渣中分别加入4mL氯仿，振摇，使残渣溶解，各精密加入0.1%异烟肼-无水甲醇溶液（取异烟肼0.1g，盐酸0.126mL，加无水甲醇使溶解成100mL）4mL摇匀，置55℃暗处保温45min后，放冷至室温，用氯仿稀释至刻度，摇匀。取上述氯仿液于300-500nm波长进行扫描，结果最大吸收波长在415nm，故测定波长为415nm。 2.2.4 标准曲线制备
精密称取经105℃干燥至恒重的醋酸地塞米松对照品8mg，置25mL容量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置5mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，作为醋酸地塞米松对照品溶液，按2.2.3中步骤分别在415nm处测定吸光度，以对照品溶液的浓度（ug/mL）为横坐标,以吸光度A为纵坐标，作图，求得回归方程：结果表明：醋酸地塞米松在13.0-64.0ug/mL范围内，浓度与吸光度呈良好的线性关系。 2.2.5 重复性实验
取醋酸地塞米松对照品溶液（25.6ug/mL），依法测定，连续测量5次. 2.2.6 稳定性实验
取醋酸地塞米松对照品溶液（12.8ug/mL）在配制0、5、10、20、25小时依法测定吸光度。
2.2.7 样品含量测定
精密称取样品3.34g（含醋酸地塞米松约2.5mg），按2.2.2进行操作，测得吸光度计算出样品的标示百分含量。
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2.2.8 回收率实验
精密称取经105℃干燥至恒重的醋酸地塞米松对照品2.5mg，加到醋酸地塞米松样品3.4g中，搅匀，按2.2.2步骤操作，得到样品加对照品的回收率实验。
2.3 硝酸咪康唑标准曲线制备
2.3.1 吸收波长选择
称取经105℃干燥至恒重的硝酸咪康唑20mg，置50mL容量瓶，加二甲基亚砜至恰溶，加95%乙醇至刻度，摇匀，备用（Ⅰ液）。另取硝酸咪康唑乳膏适量，加95%乙醇于80℃水浴温热搅拌溶解，放冷，过滤，制成0.4mg/mL的液体，备用（Ⅱ液）。上述两种液体分别在波长为200-400nm范围扫描，可见Ⅰ液、Ⅱ液在280nm处有最大吸收，故以280nm为测定波长，测定硝酸咪康唑含量。 2.3.2 标准曲线制备
称取经105℃干燥至恒重的硝酸咪康唑适量，少量二甲基亚砜溶解，加95%乙醇制成浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6和0.7mg/mL的溶液，在280nm处，以95%乙醇为空白，测定吸光度A，得线性方程。
2.4 醋酸地塞米松和硝酸咪康唑配伍
2.4.1 配伍后醋酸地塞米松波长选择
将硝酸咪康唑对照品加入复方醋酸地塞米松乳膏中，使乳膏中醋酸地塞米松的含量与硝酸咪康唑成1：0.5比例，取配伍后乳膏适量（约相当于醋酸地塞米松2.5㎎）精密称定，置100mL烧杯中，加无水乙醇约25mL，置80℃水浴上加热搅拌使醋酸地塞米松溶解，再置冰水浴中充分冷却，过滤，滤液置100mL容量瓶中，同法提取3次，滤液并入容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
取上述溶液4mL置于具塞10mL容量瓶中在水浴上蒸干乙醇，残渣中加入4mL氯仿，振摇，使残渣溶解，精密加入0.1%异烟肼-无水甲醇溶液（取异烟肼0.1g，盐酸0.126mL，加无水甲醇使溶解成100mL）4mL摇匀，置55℃暗处保温45min后，放冷至室温，用氯仿稀释至刻度，摇匀。取上述氯仿液于300-500nm波长进行扫描，结果最大吸收波长在415nm，故配伍后测定醋酸地塞米松的含量波长为415nm。 2.4.2 配伍后硝酸咪康唑波长选择
取配伍后乳膏适量约（约含硝酸咪康唑20mg），用20mL95%乙醇在80℃水浴上搅拌溶解，放冷，过滤，滤液置50mL容量瓶中，残渣用20mL95%乙醇分四次洗涤，与滤液合并，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀。在波长为200-400nm范围扫描，在300nm处有吸光度，随
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波长增大，吸光度减小，无最大吸收。 2.4.3 配伍后最佳比例选择
醋酸地塞米松和硝酸咪康唑不同比例配伍后，测定醋酸地塞米松的含量，选择适宜比例。
2.4.5 考察配伍温度和配伍时间对配伍后含量的影响
取适宜比例配伍后，分别放置在0℃、10℃、20℃、30℃的环境下，分别在1h、2h、3h、4h测定醋酸地塞米松的含量。
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3 实验结果与分析
3.1 醋酸地塞米松含量测定的结果与分析
3.1.1 标准曲线的制备结果与分析
回归方程:A=2.1016C+0.5305(r=0.9989,n=5)，表明在0.013～0.064mg/ml范围线性关系良好。
0.70.670.640.610.580.550.01吸光度A0.020.030.04浓度（mg/mL)0.050.060.07图1 醋酸地塞米松标准曲线
醋酸地塞米松在240nm波长处有最大吸收，但是复方醋酸地塞米松软膏中基质在此波长处吸收干扰非常明显，加异烟肼与醋酸地塞米松发生可逆的缩合反应，显色在415nm处有最大吸收，可忽略基质的影响。所以在制备标准是应该操作准确，减少操作过程中的误差。
3.1.2 重复性结果与分析
吸光度平均值为0.5864，RSD为0.272%（n=5）。
表4 醋酸地塞米松重复性实验
次数 吸光度
3.1.3 稳定性实验结果分析
吸收度平均值为0.5576，RSD为0.255%。
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1 0.586
2 0.587
3 0.586
4 0.587
5 0.586
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表5 醋酸地塞米松稳定性实验
时间/h 吸光度
实验结果样品在25h内吸光度A基本不变，表明稳定性良好。 3.1.4 样品含量测定验结果分析
三个批号：1号、2号、3号醋酸地塞米松乳膏含量分别为：0.751mg/g, 0.747mg/g, 0.762mg/g(n=3)。平均值为0.7506mg/g,RSD为0.28%.
表6 醋酸地塞米松样品含量测定
编号 1 2 3
批号 080701 080702 080703
含量(mg/g) 0.751 0.749 0.752
0 0.558
5 0.557
10 0.558
20 0.558
25 0.557
实验用复方醋酸地塞米松乳膏规格为0.75mg/g，实验结果与规格略有偏差。 3.1.5 回收率实验结果分析
6次测定的平均回收率为98.86%，RSD为1.70%。
表7 醋酸地塞米松回收实验
样品 编号 1 2 3 4 5 6 样品 g 3.3360 3.3402 3.3312 3.3389 3.3414 3.3439 加入量 mg 2.5 2.4 2.5 2.6 2.4 2.4 测得量mg 4.98 4.89 4.98 5.10 4.91 4.89 回收率 % 99.2 99.58 99.6 99.9 102.08 99.58 99.99 平均回收率% 0.19 RSD % 所以在复方醋酸地塞米松乳膏中加入醋酸地塞米松对照品，测定吸光度，得出含量后减去乳膏中醋酸地塞米松的含量，计算回收率。
3.2 硝酸咪康唑标准曲线制备
3.2.1 标准曲线的制备结果与分析
回归方程:A=1.3496C+0.1006(r=0.9990,n=7)，表明在0.1～0.7mg/ml范围线性关系
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