yuhaibo: 那么说有些试剂的量还可以自己调整么
newfish:开始我也不知道是卖试剂的人说可以我试了一下还不错！你的那种是不是10次要1200元左右？做这个实验一定要注意不要干片，可以在最后用苏木素复染一下！！效果比较好
wz3721: 我想做培养细胞的TUNEL调亡检测法,请问用那种试剂盒比较好啊? midas：我们这里是5000RMB的，DAB显色！
mecheleyu: 我们实验室在用PROMEGA的TUNEL调亡试剂盒，40人份的2900快，师兄师姐的效果挺好的！主任的5000快的应该是ROCHE公司的吧，名声比较好！要是没钱的话，2900的也可用！
切片处理
sx7878：我想做脊髓组织的HE染色、免疫组化（抗体用于冰冻切片）和TUNNEL染色。
灌流后我用蔗糖多聚甲醛PBS脱水，然后是否要用PBS洗去固定液再做切片呢？，我要取好所有的脊髓去做切片，请问可以放在-20度保存吗？蔗糖处理是否会破坏组织结构而影响观察组织病理形态呢？我感觉如果不灌流脊髓很难取，请问有没有不灌流就能取脊髓的？
sprac：
1、不需要用pbs洗去固定液，多聚甲醛固定不会影响切片。
2、不可放在-20保存，除非先用液氮处理。如需保存一段时间，可在多聚甲醛中保存。 3、蔗糖处理是为了更好的保存形态。
4、灌流的效果好，但较麻烦，如果要求不高，可浸泡固定，先取较多组织浸泡固定，过一段时间后再继续固定。
石蜡切片常规脱蜡水化
zlepo：因进行TUNEL实验，要做石蜡切片常规脱蜡水化，但对具体的实验流程不太明确
niexiuqing：这是我们进行TUNEL实验，要做石蜡切片常规脱蜡水化步骤： 1、二甲苯5分钟两次 2、100%乙醇5分钟两次 3、95%乙醇3分钟一次 4、85%乙醇3分钟一次 5、80%乙醇3分钟一次 6、75%乙醇3分钟一次
qinkunqk：我们实验室的流程是：切片放入 二甲苯 I 15分钟 二甲苯II 15分钟 100%乙醇I 3分钟 100%乙醇II 3分钟 95%乙醇 3分钟 83%乙醇 3分钟 70%乙醇 3分钟 50%乙醇 3分钟 30%乙醇 3分钟 蒸馏水 3分钟
tommaomao：没有那没麻烦，我建议你用三步脱水法，80酒精2分钟，95酒精2分钟，100酒精两分钟，即可很好用我一直是这样的。
Tunel检测中的盖玻片问题
yuandong: 请问各位做Tunel检测实验,24孔板中放置方形盖玻片还是圆形盖玻片更好?以及用多大规格的盖玻片呢?
midas: 圆形盖玻片更好, 直径7-8mm。不过在用方的玻片放到35mm皿中也可以的。 做TUNEL组织固定的时间
sallyshan：我做的是大鼠神经组织的TUNEL检测。用4%多聚甲醛经心脏灌流固定，用同样的固定也做的后固定，不过后固定的时间较长，我想知道TUNEL检测对固定时间是否有要求？为什么脱蜡后还要固定？
niexiuqing： 4%多聚甲醛经心脏灌流固定只是冲洗掉血管内的红细胞，TUNEL检测的固定时间一般4-24小时。脱蜡水化后我们实验中没有在用4%多聚甲醛固定，进入用3%H2O2孵育10分钟
independence：组织块较小，用bouin液已经固定了30小时，想做石蜡切片然后做TUNEL，是不是固定时间过长，会影响效果吗？
06lnavy：你是保存在4度吗,如果在4度理论上不应该有太大的影响,但也要根据你是检测的什么指标,不同指标影响的结果不一样
apbai：组织块的保存对实验效果有一定的影响。 现在要做的是：尽快用石蜡包埋，尽快开始你的实验 标本的贮藏
hotter2046：现有一些-70度冰箱贮藏的标本，请问用这些标本做免疫组化、TUNEL检测调亡有影响吗？
gogoicq：-70度标本关键是储存了多长时间,几年,还是可以的我最长用过5年的标本,不知道你是几年的.但即便是不是10年以上,我建议也可试试!
tommaomao：不受影响，因为在-70的低温下蛋白发生降解的速度几乎停止，故可以在使用，虽然我没有做过，但我做过血清的LDH,半年后还可以检测出来，就是让血清在-70度冰箱保存的。
qxm123：一些-70度冰箱贮藏的标本，用这些标本做免疫组化、TUNEL检测调亡有影响。这些放在-70度冰箱贮藏的标本不降解，但复温后，组织形态发生变化，细胞变松，
形态不完整。我们试过，-70度冰箱贮藏的标本制成蜡块后，切片时易碎。HE染色后细胞形态就不完整。做免疫组化、TUNEL检测调亡的结果可想而知。你可以取一块试一试。做WESTERN、PCR没有影响。如果用OTC处理的组织可以做冰冻切片，效果一样。
apbai：-70度冰箱可以保存组织很长时间，并且基本能保证蛋白质、DNA的稳定而不被降解。就是说，-70度冰箱保存的标本能满足你的要求。
另外，你具体实验时，确定好你的免疫组化所需的是冰冻切片，还是石蜡的，可根据不同的要求，进一步对组织进行处理。
如果你没有做过这方面的实验，那么预实验摸索实验条件很重要。 有关液体配制
BSZLY2003: 我用的是德国罗氏ＴＵＮＥＬ试剂检测培养细胞凋亡．请问：１用ＰＢＳ漂洗时是用０．１Ｍ的还是用０．０１Ｍ的ＰＢＳ；２配０．１％曲通－１００时，０．１％的柠檬酸钠是不是指１Ｌ水中加０．１g的柠檬酸钠固体，还是有其他的配方；３有人说ＴＵＮＥＬ反应液可以和ＰＢＳ按１：５稀释．
zhoujueyu: 罗氏应该是美国公司吧。针对你的问题，我查了一下相关资料：据我所知： PBS漂洗所用的浓度是0.05M（PH7.6）；在文献中看到用的Triton-100多是1％的，若你是要配0.1％的Triton-100，0.1％的柠檬酸钠当然就是在1L水里面加入1g柠檬酸钠固体了。
下面这篇文章中用的细胞原位凋亡检测POD 试剂盒购自美国罗氏公司，你可以参考一下：
http://www.wjgnet.com/1009-3079/12/1329.pdf
isshanglei：请问各位，想做心肌的TUNEL检测，Triton-X100的配制方法，现有德国宝灵曼试剂盒，北京中杉枸橼酸缓冲液0.01M（颗粒状）可配2000毫升，Sigma的Triton-X100（Reagent）液体100ml，买时没有附说明，现在急于配成0.1%Triton-X100加入0.1%枸橼酸缓冲液，请求帮助，再有枸橼酸缓冲液0.01M是否需要调PH值，应调到多少。
qxm123：我们用的是1%Triton-X100处理15分钟，1毫升Triton-X100原液加入0.1%枸橼酸缓冲液100毫升中。枸橼酸缓冲液0.01M不需要调PH值，中杉枸橼酸缓冲液0.01M（颗粒状）PH已经调好，PH为6.0。
hotsss：我现在正在做细胞凋亡的实验，有些问题不是特明白，特向大家求教：10mMold的Hcl-Tris液该如何去配制？具体用量怎么计算啊？谢了！还有就是在做TUNEL时，胃蛋白酶可以用胰蛋白酶来代替，说明书上说胰蛋白酶必须稀释至0.125，还说要融于0.25%的盐酸中，为什么？
同济飓风：10mmol/L的Tris-HCL应该按照摩尔浓度称出Tris-base,再加水，注意要留出一点加HCL调整PH的余地，至于是所少要根据你的HCL浓度来定，一般我们实验室用浓HCL直接调，用加样器加，这样不容易加多了，最后不足的部分再加水补足体积。整个调整PH过程要在校正后的PH计上进行，用磁力搅拌器使整个溶液混匀，但是不要形成太大的漩涡，PH计更不能在漩涡的中心，不然会有空气干扰的。
你说的胰蛋白酶溶入0.25％HCL 中，但是就我所知，胰蛋白酶在PH为8的时候消化能力最强（消化细胞用的就是PH为8），TUNEL我没有做过，刚才说的只是我的一点看法
请问做培养细胞的TUNEL是否要做细胞爬片
DONGXING：我想用Tunel 法观察体外培养的细胞的凋亡情况，请问我是否要先做细胞爬片？在24孔板或96孔板上直接做行不行？
raccoon：请问您要不要拍照片？24孔板和96孔板都不行啊
cheungsober：你说的是组化实验，已经是常规了，在我们这里是有专门的实验员－－中专生来做，步骤不难。无论是爬片还是涂片都很简单，固定可以使用丙酮１０－１５分／也可用９５％乙醇２０分均在４度条件下。爬片可以使用载玻片，在平皿中进行，在２４孔板上也可应，但需要用玻璃刀裁剪成小片能放入才行
DONGXING：我肯定要拍照片，请问raccoon这位朋友如果拍照片的话，我该怎么做呢？
请问cheungsober 如果我不用TUNNEL这个指标，哪些指标是较新而又能说明问题呢？另外因为我的处理因素较贵我只能在２４孔板上进行，因此我想请问你我是应当用载玻片还是应当用盖玻片呢，做之前应当怎样处理这个爬片呢？
cheungsober：测量凋亡的指标很多,一般选用2-3种,其中形态学指标是金标准,现在比较流行用流式细胞仪(BD,company),上PI和ANNEXIN V(联科生物,杭州,汪庆东)，另外可以用Hoechst33258荧光显色,还可以用DNAladder----不过很难跑，跑出来的是幸运，对时间的要求极高，还可以测组蛋白。TUNNEL也是可以用的，但目前只能作为指标的一中，还有就是此法若非熟练者操作，假阳性率极高，所以是3级硕士想混毕业者的首选指标.