浏阳市人民医院 医学检验中心 痰涂片镜检及痰培养 实验室质量保证手册 文件编号：lryj-jh-01 生效日期：2012.04.01 版本号：1.0 第 24 页 共 32 页 盲法复检不是为了验证单个病人诊断正确与否, 而是评价整个实验室操作水平。评价的内容除了涂片镜检结果存在的误差之外，还包括涂片样品的质量（痰液与唾液的比例）、涂抹的大小和厚度、染色质量如何等, 以便采取纠正措施，改善实验室工作质量。 1. 误差分类
（1 ）定性错误包括高假阳性和高假阴性
高假阳性（High False Positive ， HFP）：阴性片被错误地判读为2 ＋～4 ＋阳性。
高假阴性（High False Negative ，HFN ）：2 ＋～4 ＋阳性涂片被错误地判读为阴性。
（2 ）定量错误包括量化误差、低假阳性和低假阴性
量化误差（Quantification Error，QE）：同一张阳性涂片受检方和控制方阳性判断级别的差异。
低假阳性（Low False Positive ，LFP ）：阴性涂片被错误地判断为低阳性（1 ＋以下）。
低假阴性（Low False Negative ，LFN ）：低阳性（1 ＋以下）涂片被错误地判断为阴性。
2. 常见“误差”原因 假阳性 （FP）
1) 假象（例如着色沉淀或结晶）被误识为抗酸杆菌 2) 抗酸杆菌来自以前阳性涂片的镜油 3) 原始报告后着色的抗酸杆菌退色
1 、2 ）对技术人员复训，3 ）对假阳性涂片重新着色并复检。
浏阳市人民医院 医学检验中心 痰涂片镜检及痰培养 实验室质量保证手册 文件编号：lryj-jh-01 生效日期：2012.04.01 版本号：1.0 第 25 页 共 32 页 假阴性（FN）
1 ）观察涂片的视野数量不足 2 ）显微镜检查技术能力差
3 ） 染色操作不规范（抗酸杆菌颜色暗淡、背景对比不足或过高） 4 ）显微镜存在问题 5 ）染液质量查
1 、2 、3 ）对技术人员复训 ，4 ）现场检查显微镜， 5 ）重新购置质量合格的染料并重新配制染液 。
量化误差 （QE） 1 ）观察涂片时间不足
2 ）阳性涂片的分级报告标准掌握差 3 ）显微镜检查技术能力差 4 ）显微镜存在问题
1.2.3）对技术人员复训 ，4 ）现场检查显微镜工作状态。 （七）复检结果反馈
1. 盲法复检的最终目的是提高实验室涂片镜检的质量，必须按规定、持续和及时地向下级实验室反馈复检结果。
2. 复检发现的假阳性或假阴性涂片，由复检单位保存，以便最初的检验人员了解自己的失误，查找原因提高检测质量。
3. 初次复验者对最初的涂片结果并不清楚, 应当将再次复验者的结果反馈给初次复验者，使其有机会了解自身水平。
4. 反馈内容应包括造成失误可能存在的原因，和技术改进建议。 5. 对存在严重误差（定性错误和频繁的定量错误）的实验室，再
浏阳市人民医院 医学检验中心 痰涂片镜检及痰培养 实验室质量保证手册 文件编号：lryj-jh-01 生效日期：2012.04.01 版本号：1.0 第 26 页 共 32 页 次复验者应及时反馈信息，并进行现场调查，协助查找原因解决问题。 6. 按统一要求填写反馈报告。 三、批量检测
批量检测是指定期地由国家或省级参比室向外围实验室发送已经染色和/ 或未染色的涂片，由外围实验室人员来读片并对读片结果进行评估。这种方法是检查实验室技术人员的染色能力和/ 或读片能力，主要检测个人的操作技术，而不是检测实验室的整体操作水平，也 不是检测实验室的常规操作。当没有其它质量评价方法存在时，批量检测可以作为评价当前操作第一个有价值的测量方法 。 （一）、测试涂片准备和要求
1 、测试涂片由国家参比室和省级参比室负责制备。
2 、测试涂片包括染色和未染色涂片，低阳性的涂片，太厚或太薄的涂片，染色不好的涂片。
3 、每张阳性涂片的抗酸杆菌数量都已确定，阴性涂片都具有一致的背景。
4 、为提高制作的效率，参比实验室应按 50～100 张涂片为一批进行制备。
5 、已染色的涂片主要用于评估痰检人员的镜检能力，不能表明技术人员的准备染色剂和染色能力。
6 、未染色的涂片可检测技术人员的综合技术水平，包括染色剂的制备、染色、镜检和结果报告。
7 、当参比实验室条件有限，不能准备批量检测涂片时，可利用已染色的病人涂片（如盲法复检后的涂片）用于批量检测。此法可降低国家或省参比室的工作量，但仅能评价技术人员的镜检能力（该法的缺
浏阳市人民医院 医学检验中心 痰涂片镜检及痰培养 实验室质量保证手册 文件编号：lryj-jh-01 生效日期：2012.04.01 版本号：1.0 第 27 页 共 32 页 点是涂片之间缺乏一致性，即每个实验室接受的是不同背景的涂片）。 8 、批量检测是评价个人的能力和操作水平，实验室人员不能共享批量检测结果，每个实验室人员应有自己的独立结果。
9 、测试人员包括：1 ）新上岗的结核病实验室技术人员；2 ）现场督导（根据情况确定）；3 ）盲法复检中有较重大误差者的能力测试；4 ）常规培训活动内容之一；5) 年读片量在500 张以下的实验室。 （二）、涂片的数量和类型
一次批量检测限定的涂片量为10 张，涂片应包括不同等级的阳性涂片和一定数量的阴性涂片。批量检测时送往各实验室的涂片应包含相同比例的阳性片和阴性片。但批次不同，阳性和阴性的比例也不同。
浏阳市人民医院 医学检验中心 痰涂片镜检及痰培养 实验室质量保证手册 文件编号：lryj-jh-01 生效日期：2012.04.01 版本号：1.0 第 28 页 共 32 页 分支杆菌分离培养标准操作程序
【试验原理】：
标本通过适当的处理方式，杀灭杂菌，结核杆菌保留活性，根据专用培养基上是否有结核杆菌生长，判断标本中是否含有结核杆菌。
【标本留取】：
1. 发放40ml已灭菌标本瓶给病人。 2. 嘱咐病人漱口、深咳痰、量3-5毫升。 3. 标本瓶上写好病人姓名、送检日期。 4. 与检验单一起送检验科。
【标本处理】： 1不同标本的处理方法
1.1痰标本视标本性质加1～2倍体积4%NaOH溶液，振荡混匀2～3分钟。
1.2支纤镜标本同痰标本处理
1.3尿、胸水、腹水标本离心沉淀后，沉淀物加1～2倍体积4%NaOH溶液，振荡混匀2～3分钟。
1.4组织标本粉粹后，加1～2倍体积4%NaOH溶液，振荡混匀2～3分钟
1.5大便标本加一定量的无菌生理盐水，搅拌混匀，静止5～10分钟，取上层液加等体积4%NaOH溶液。
1.6脑脊液标本清亮时可直接用中性罗氏培养基，浑浊时加体积4%NaOH溶液。
2消化处理时间
从加入4%NaOH溶液开始计时，室温放置15分钟，15分钟开始接种，20分钟内接种完。