0.4M L-Arginine 69.6 g 2 M 尿素 120 g 溶液pH调节到7.5 透析24小时
20mM Na2HPO4.2H2O 3.56 g 150mM NaCl 8.7 g 0.4M L-Arginine 69.6 g 1 M 尿素 60 g 溶液pH调节到7.5 透析24小时
20mM Na2HPO4.2H2O 3.56 g 150mM NaCl 8.7 g 溶液pH调节到7.5 透析24小时
3.4 镍柱再生（1 ml）
镍柱在多次使用之后，柱上会积累一些异物，其影响重组蛋白挂柱的效率，此时可以通过以下流程将镍柱重生。
①. 除去预装柱的Ni离子：用10 ml stripping缓冲液以1 ml/min流速洗涤柱子; ②. 分别用10 ml缓冲液A和10 ml三蒸水以1-2 ml/min流速洗涤柱子； ③. 用1 M NaOH充满柱子并保住2小时左右（NaOH用于除去柱子上的残余蛋
白质）；
④. 分别用10 ml缓冲液A和10 ml三蒸水以1-2 ml/min流速洗涤柱子； ⑤. 将0.5 ml 0.1 M的NiSO4以0.5 ml/min流速注入柱中；
⑥. 分别用10 ml缓冲液A和10 ml三蒸水以1-2 ml/min流速洗涤柱子； ⑦. 用2 ml 20%乙醇洗涤柱子，封闭柱子并置于4oC。 注：stripping缓冲液配制（50 ml）：
20
20mM Na2HPO4.2H2O 0.18 g 500mM NaCl 1.45 g 50mM EDTA-Na 0.93 g 调节pH至7.4，定容至50 ml。
1 M NaOH配制（10 ml）：
取0.4 g NaOH溶于10 ml三蒸水中。
21