丙烯酰胺浓度 分辨率 15% 15~45kd 12.5% 15~60kd 10% 18~75kd 7.5% 30~120kd 5% 60~212kd
二、操作流程：
1、 X%分离胶的配制
A液 x/3ml B液 2.5ml H2O （7.5-x/3）ml 10%过硫酸铵 50μl
TEMED 5μl Total Volume 10ml 2、 浓缩胶的配制
A液 0.67ml C液 1ml H2O
2.3ml
过硫酸铵 30μl
TEMED 5μl Total Volume 5ml 3、 样品的处理及上样
将蛋白质样品与5×上样缓冲液混合（20μl样品+5μl上样缓冲液），沸水煮2~10分钟，高速离心1分钟，用微量进样器上样20μl。
4、 电泳
浓缩胶部分电压 60V 分离胶部分电压 120V 5、 染色、脱色
染色 0.5小时
脱色 0.5小时（重复两次）
三、操作步骤
（一） 灌制分离胶
1．组装凝胶模具可按照使用说明书，装配好灌胶用的模具。
2．将A液、B液及蒸馏水在一个小烧杯中混合，A液中的丙烯酰胺是神经毒素，操作时必需戴手套。
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3．加入过硫酸铵和TEMED后，轻轻搅拌使其混匀（过量气泡的产生会干扰聚合）。凝胶很快会聚合，操作要迅速。
4．小心将凝胶溶液用移液枪缓慢加入两块玻璃片之间，注意不要产生气泡。 5．当加入适量的分离胶溶液时，轻轻在分离胶溶液上覆盖一层1－5mm的水层，这使凝胶平面变得平整。
6．等待30－60分钟，使凝胶聚合。当凝胶聚合后，在分离胶和水层之间将会出现一个清晰的界面，可以微微倾斜模具，检测凝胶是否聚合。
（二） 灌制浓缩胶
1．吸进覆盖在分离胶上的水。
2．将A液、C液和蒸馏水在小烧杯中混合。 3．加入过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀。
4．将浓缩胶溶液用移液枪加至分离胶上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。 5．将梳子插入凝胶内，直至梳子齿的底部与前玻璃板的顶端平齐。必需确保梳子齿的末端没有气泡。将梳子稍微倾斜加入可以减少气泡的产生。约30分钟凝胶聚合。
6．凝胶聚合后，小心拔出梳子，不要将加样孔撕裂。
7．将凝胶放入电泳槽内，将电泳缓冲液加入内外电泳槽中，使凝胶的上下端均能浸泡在缓冲液中。
（三） 制备样品和上样
1．将实验蛋白质样品与5×上样缓冲液（20μl样品+5μl上样缓冲液）在Eppendorf管中混合。
2．沸水加热2~10分钟。高速离心1分钟，如果有大量蛋白质碎片则应延长离心时间。 3．用微量注射器将样品加入样品孔中。注意避免带入气泡，气泡易使样品混入到相邻的加样孔中。
（四） 电泳
1．电极插头与适当的电极相接。电流应流向阳极。 浓缩胶部分电压 100V 分离胶部分电压 200V
2．将电压调至100V，保持恒压。当样品跑至分离胶时，将电压调至200V，保持恒压。 3．当染料前沿迁移至凝胶底部时，关闭电源，结束电泳。
4．从电泳槽中取出凝胶玻璃板，并轻轻撬开玻璃板，凝胶会贴在其中的一块板上。 （五） 染色与脱色
1．将胶移入一个盛有少量考马斯亮蓝染色液的培养皿中，在摇床上振荡染色，使染色均匀。染色时间为0.5小时。
2．弃去染液，换脱色液。清晰的蛋白条带很快会显现出来。为了脱色完全，需数次更换脱色液并振荡过夜。
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