浓度与活力SOP:显微镜 使用5版推荐的相差显微镜,相差显微镜这种能够将精液 中的大部分杂质与精子区分的高级光学系统,使精子头部发光,杂质却与普通生物显微镜一样显示为灰色,这样可以过滤掉大部分的杂质。
显微镜要每天擦拭干净,结束油镜观察后要及时清洁镜头。每年至少用对中望远镜对相位环校验一次,并做好校验记录。
11
浓度与活力SOP:精子计数板 必须使用生产过程有质控措施和品质管理的精子计数板 ,需要有计数池深度检测报告。
建议使用的计数板的深度应符合以下标准:
10μm±0.5μm 间隙平行度标准:
多点检测的最大值和最小值误差小于0.5μm
计数板使用前要清洗干净(可使用洗涤剂和超声波清洗机),确保没有灰尘或水痕影响计数板的深度及背景。
计数板的深度每6-12个月必须校准一次,并做好校验记录。
12
浓度与活力SOP:37℃恒温条件 1)精液采集后应迅速送抵实验室,并立即置于37℃水浴箱或金属浴多孔保温块内。
2)精子计数板在使用前至少放在37℃恒温预热台上预热10分钟以上。
3)最好使用专门适合相差显微镜使用的精子计数板专用恒温载 物台。
13
浓度与活力、形态学SOP:精液的混匀和抽样 1)精液在取样用于检测前,应充分混匀标本。可使用二维摇动器 而不能使用漩涡震荡器。
2)每份标本要重复抽样,在每次取样前都要再次混匀标本。 3)只有在重复取样的结果一致时才认可此测定值。
检查足够多的精子减少抽样误差 每个实验室都要权衡专家精液分析精确度与世界花费几检测人
14
员疲劳导致准确性下降之间的利弊。检测精子浓度与活力,每次至少检测200条精子,抽样误差是7%,若抽样在查200条精子,则合并抽样误差小于5%,可以达到WHO第5版的要求。形态学检查比较耗时复杂,最少每次检查100条精子(误差为10%),重复检查的合并抽样误差可以更小些。
因为要减少抽样误差而增加数倍的工作量,在人员无法增加 时,唯一的出路是使用合符要求的CASA。
取样和加样时注意的SOP细节 许多操作细节必须在SOP中予以规定,如:
●稀释精液时抽取的样本量要大于0.5ml,使样本具有代表性。 ●做浓度与活力检测时加样的量要严格控制在5μl,太少会产生气泡。 15