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养基变碱，使指示剂呈碱性反应。 培养基：枸盐酸盐琼脂斜面培养基
试剂：溴麝香草酚蓝（pH6.0以下呈黄色，pH7.6以上呈蓝色）
方法：在枸盐酸盐琼脂斜面上浓密划线，大量接种被检菌，于35 ℃培养1~ 4天，逐日
观察结果。
结果：枸盐酸盐琼脂斜面上有细菌生长，培养基变成深蓝色为阳性；无细菌生长，培养
基颜色不变（淡绿色）为阴性。
应用：有助于肠杆菌科属间的鉴别。埃希菌属、志贺菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属均
为阴性；产气肠杆菌、沙门菌属、克雷伯菌属、黏质和液化沙雷菌、某些变形杆菌以及枸橼酸杆菌为阳性。
13、填空题
⑴ 在形态和染色性上具有特征的致病菌常用＿＿＿方法作初步诊断。如 和 菌。 ⑵ 鉴定细菌常用 凝集试验。此方法是用已知 检测未知 。 ⑴ 直接涂片镜检 结核分枝杆菌 白喉棒状杆菌 ⑵ 直接玻片 抗体 抗原
14、综合分析题
实验室在对细菌培养时，需先制备培养基，根据所培养的细菌不同，选择不同类型的培养基，如培养营养要求高的细菌时，需制备含血清培养基（即在培养基中加入血清）。细菌的保存常用细菌保存液，有时也用牛奶保存，如幽门螺杆菌。 思考题：
⑴ 制备培养基过程中应注意什么？
⑵ 制备含血清培养基时，基础培养基和血清如何进行消毒灭菌？用于保存菌种的牛奶又如何进行消毒灭菌？
? 提示1：培养基制备过程中应注意无菌操作，以防止微生物的污染。
? 提示2：基础培养基通常使用高压蒸汽灭菌法灭菌，以杀灭包括细菌繁殖体和芽胞
在内的所有微生物。含血清培养基和用于保存细菌的牛奶，既要对其进行灭菌处理，又不能破坏营养成分，故常用间歇蒸汽灭菌法。
? 提示3：在制备培养基过程中，应注意无菌操作，通常可在经紫外线照射后的无菌
罩或实验室中进行培养基的分装。
? 提示4：在准备含血清培养液时，通常使用过滤除菌法除菌，以确保血清中的营养
成分不被破坏。
细菌与环境
1、名词解释：正常菌群；条件致病菌；菌群失调症；重叠感染；消毒；灭菌；无菌；无菌操作；噬菌体；前噬菌体；毒性噬菌体；溶原性细菌；滤过除菌法 ⑴ 正常菌群：定居于正常人体体表及其开放性腔道中的微生物群。在正常情况下对机体有益无害。由于在正常微生物群中以细菌为主，而且对细菌研究得较多而深入，所以将正常微生物群通称为正常菌群。
⑵ 条件致病菌：正常情况下不致病，在特定条件下可致病的正常菌群，称条件致病菌（或：机会致病菌）。
⑶ 菌群失调症：宿主某部位正常菌群中各菌种间的比例发生较大幅度改变并超出正常范围
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的状态称为菌群失调。由此而引起的病症称为菌群失调症。
⑷ 重叠感染：或称为二重感染，是一种后果较为严重的菌群失调症，即在抗菌药物治疗原感染性疾病或预防某些微生物感染的过程中，发生的一种新感染。
⑸ 消毒：杀死物体上或环境中的病原微生物的方法。但不一定能杀死含芽孢的细菌或非病原微生物。
⑹ 灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 ⑺ 无菌：不存在活的微生物的意思。
⑻ 无菌操作：防止微生物进入人体或其他物品的操作技术。
⑼ 噬菌体：是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒。 ⑽ 前噬菌体：整合在细菌染色体上的噬菌体基因。
⑾ 毒性噬菌体：能在宿主细胞内复制增殖，产生许多子代噬菌体，并最终裂解细菌的噬菌体，称毒性噬菌体。 ⑿ 溶原性细菌：染色体上带有前噬菌体的细菌。
⒀ 滤过除菌法：用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌，达到无菌的目的。适用于不耐高温灭菌的物品如血清、毒素、抗生素及空气等的除菌。生物安全柜也是根据这个原理，利用高效空气过滤器的过滤作用，除去空气中的微生物，以达到保护操作对象、保护操作者、保护环境的目的。但滤过除菌法只能除去细菌，一般不能除去病毒、支原体、衣原体和细菌的 L 型。
2、正常菌群的生理作用有哪些？正常菌群转化为机会致病菌的条件有哪些？（简要说明微生态失调的主要原因有哪些？） 正常菌群的生理作用：
⑴ 生物拮抗；⑵ 营养作用；⑶ 免疫作用；⑷ 抗衰老作用；⑸ 抑肿瘤作用。 正常菌群转化为机会致病菌的条件有：
⑴ 抗生素的使用导致菌群失调；⑵ 正常菌群寄居部位改变；⑶ 宿主免疫功能低下如免疫抑制剂使用、激素、射线照射、细胞毒物的使用导致宿主免疫功能低下。
3、常用湿热灭菌方法的种类及其效果与适用范围。
⑴ 巴氏消毒法：用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物（如结核杆菌）、保持物品中所需不耐热成分不被破坏的消毒方法。 持续法: 61.1-62.8℃ 30分钟； 瞬间法: 71.7℃ 15-30秒； 常用于消毒牛奶、酒类。
⑵ 煮沸法：常用于消毒食具、刀剪、注射器等
繁殖体 ：煮沸100℃，5min； 芽孢：煮沸100℃，1～3h。
⑶ 流动蒸气消毒法：阿诺蒸锅或蒸笼。
繁殖体 ：煮沸100℃，15～30min
⑷ 间歇蒸气灭菌法：如血清培养基的灭菌。
⑸ 高压蒸气灭菌法：一种最有效、最彻底的灭菌方法。在103.4 kPa（1.05kg/cm2）蒸气压下，温度121.3℃，维持15-20min，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。是普通培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、耐湿物品的最佳灭菌法。
4、高压蒸汽灭菌法所要求的条件和用途各是什么？
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高压蒸气灭菌法是一种最常用、最有效的灭菌方法，是在密闭的蒸气容器中进行。随着压力升高，蒸气的温度也相应升高，在103.4kpa 蒸气压下，温度达到121.3℃，维持15～20 min，可杀灭包括细菌芽胞在内的微生物。适用于耐高温、耐潮湿物品的灭菌，如一般培养基、生理盐水、手术用品等。但该温度还不足以灭活朊粒和热原质。
5、请叙述紫外线的杀菌作用机制、特点和注意事项。
⑴ 紫外线（UV）的杀菌机制主要是损伤细菌DNA构型，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录，导致细菌死亡。 ⑵ 特点与注意事项：
① UV的杀菌作用与波长有关：240-300nm波长的紫外线有杀菌作用，其中以265-266nm最强，因其正好与DNA的吸收光谱一致。 ② 紫外线的穿透力极弱：不能透过玻璃或纸张等，故一般只用于空气消毒及物体表面消毒。 ③ 杀菌波长的UV对人体皮肤、眼睛有损伤作用，使用时应注意防护。 ④ 一般用低压水银蒸气灯做紫外线杀菌处理。
6、简述乙醇、碘酊、过氧化氢、过氧乙酸、戊二醛、环氧乙烷消毒灭菌的主要特点。 乙醇消毒灭菌的机制、特点及主要用途：
⑴ 机制：去除菌细胞膜中的脂类，并使菌体蛋白质变性与凝固。 ⑵ 特点与主要用途：
① 以浓度为70% ～75%时杀菌力最强。 ② 易挥发，需加盖保存，定期调整浓度。 ③ 主要用于皮肤消毒和浸泡体温计。
2.0～2.5%碘酊、0.5%碘伏：多用于皮肤黏膜、体温计以及其他物品的表面消毒。 过氧化氢：
机理：导致酶蛋白-SH基转变为-S-S-，导致酶活性丧失。3％~ 6％过氧化氢 kill most bacteria;10%过氧化氢 kill all microorganism including spore.
用途：可用于物品表面和皮肤黏膜消毒（如口腔、创口的消毒、厌氧菌感染的消毒）。但对金属制品有腐蚀作用。
0.2%~0.3%过氧乙酸：类似于过氧化氢。 2%戊二醛：
机理：细菌蛋白和核酸的烷化作用。 特点：广谱，高效，快速。
用途：戊二醛以0.3%NaHCO3调整pH至7.5～8.5， 配成2%水溶液，浸泡5min，适用于精密仪器、内窥镜（不能用热力灭菌法进行灭菌）等的灭菌。 环氧乙烷：
种类：杂环类化合物，沸点10.8℃，气体消毒剂。 机理：细菌蛋白和核酸的烷化作用。
特点：能穿透包裹物，广谱高效，杀灭芽胞，易燃，对人有毒性。 用途：已广泛用于医疗器械、一次性用具的灭菌。
常用的灭菌要求是浓度800~1200mg/L；相对湿度55%~60%；50 ℃；6h。 7、影响消毒灭菌效果的因素有哪些？ ⑴ 消毒剂的性质、浓度和作用时间
消毒剂种类不同，其杀菌效果亦有很大差别，大多数浓度越高，杀菌效果越好，但醇类例外，作用时间越长，杀菌效果越好。
⑵ 微生物的种类与数量：菌龄、有无特殊构造等。
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同种消毒剂对不同的微生物杀菌效果也不一致，且微生物数量越多，所需消毒的时间就越长。
⑶ 温度、湿度：温度升高可提高消毒效果。 ⑷ 酸碱度：酸碱度可影响消毒剂的杀菌效果。
⑸ 有机物：环境中有机物的存在，可影响消毒剂的效果。生理盐水清洗污染创口表面。 8、化学消毒剂的杀菌机制有哪些？各自种类的代表是什么？ ⑴ 使菌体蛋白变性或凝固，导致细菌死亡：酚类（高浓度）、醇类、重金属盐类、酸碱类、醛类
⑵ 干扰细菌的酶系统和代谢：某些氧化剂、重金属盐类(低浓度)与细菌酶蛋白的-SH基结合而使有关酶失去活性，导致细菌代谢发生障碍而死亡；
⑶ 损伤细胞膜，能降低菌细胞的表面张力并增加其通透性，胞外液体内渗，导致细菌破裂：酚类（低浓度）、表面活性剂、脂溶剂
9、毒性噬菌体增殖以何种方式增殖？它的增殖过程包括哪几个阶段？
毒性噬菌体以复制方式增殖。它的增殖过程包括吸附，穿入，生物合成和装配、成熟与释放等步骤。
10、填空题
⑴ 正常菌群的组成和数量发生明显改变时，可出现 ，由此产生的一系列临床症状称为 。
⑵ 当正常菌群发生 或 时，可成为 菌。
⑶ 正常菌群对机体的有益作用是 、 、 、 和 。
⑷ 引起微生态失调动主要原因是 、 和 。
⑸ 毒性噬菌体以 方式进行增殖，增殖过程包括 、 、 、 几个阶段。 ⑹ 噬菌体参与的基因转移与重组的方式有 和 。 ⑺ 噬菌体的化学组成主要为_______、_______。
⑻ 温和噬菌体有三种存在形式_______、______、_________。
⑴ 菌群失调 菌群失调症
⑵ 寄居部位改变 菌群失调 条件致病菌
⑶ 生物屏障作用 营养作用 免疫作用 抗衰老作用 抗肿瘤作用
⑷ 正常菌群寄居部位改变 滥用抗生素导致菌群失调 机体免疫功能降低 ⑸ 复制 吸附 穿入 生物合成 成熟与释放 ⑹ 转导 溶原性转换 ⑺ 核酸 蛋白质
⑻ 游离的具有感染性的噬菌体颗粒 宿主胞质内类似质粒形式的噬菌体核酸 前噬菌体
细菌的遗传与变异
1、名词解释：转化；接合；转导；溶原性转换；耐药性变异；卡介苗（BCG）
⑴ 转化：是供体菌裂解游离的DNA片段被受体菌直接摄取，使受体菌获得供体菌的遗传性
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状。（转化是指受体菌直接摄取供体菌游离的DNA片段，从而使受体菌获得供体菌的遗传性状的过程。） ⑵ 接合：是细菌通过性菌毛相互沟通，将遗传物质（主要是质粒DNA）从供体菌转移给受体菌，使受体菌获得新的性状。 ⑶ 转导：是以温和噬菌体为载体，将供体菌的一段DNA 转移到受体菌内，使受体菌获得新的性状。 ⑷ 溶原性转换：噬菌体感染细菌时，噬菌体作为供体，宿主菌染色体中整合了噬菌体的DNA片段，而获得新的遗传性状。
⑸ 耐药性变异：细菌对某种抗菌药物由敏感变成耐药的变异称耐药性变异
⑹ 卡介苗：卡-介二氏将有毒力的牛型结核分枝杆菌接种在含有胆汁、甘油、马铃薯培养基上，经过13年传230代，终于获得一株毒力减弱但仍保持免疫原性的变异株，即卡介苗。
2、常见的细菌变异现象有哪些？
⑴ 形态、结构变异：如 L型细菌的产生；荚膜、芽孢、鞭毛的形成与缺失。 ⑵ 菌落变异：细菌S-R变异
⑶ 毒力变异：毒力增强的变异与毒力减弱的变异
⑷ 抗原性变异：O抗原与H抗原变异；H抗原的I相与II相的互变。
⑸ 耐药性变异：细菌对某种抗菌药物由敏感变成耐药的变异称耐药性变异。 ⑹ 酶活性变异 3、简述细菌耐药性获得的主要机制有哪些？ ⑴ 钝化酶的产生 ⑵ 药物作用靶位发生改变
⑶ 细胞壁的通透性的改变，抗菌药物的渗透障碍 ⑷ 主动外排机制：细菌主动外排系统的过度表达 4、医学上重要的质粒的种类有哪些？简述质粒的主要特征。 医学上重要质粒的种类：① 致育质粒（F 质粒），② 耐药质粒（R 质粒），③ 毒力质粒（Vi 质粒），④ 细菌素质粒：如Col 质粒，⑤ 代谢质粒。 质粒的主要特点：
⑴ 具有自我复制的能力；
⑵ 编码产物赋予细菌某些性状特征：如sex pilus 、细菌素、毒素和耐药性等； ⑶ 可自行丢失与消除，非生命活动所必需；
⑷ 质粒的转移性：可通过接合、转化或转导等方式在细菌间转移； ⑸ 质粒的不相容性与相容性。
5、细菌基因的转移与重组方式有几种？
细菌基因转移与重组的方式有：转化、接合、转导、溶原性转换和原生质体融合等。 6、简述F+菌、F-菌、Hfr的区别以及F+菌和Hfr的共同特点。 F+菌：带有F质粒具有性菌毛的细菌，这种细菌可通过性菌毛将遗传物质传递给F-菌。 F- 菌：不带有F质粒无性菌毛的细菌。
Hfr：当F质粒进入受体细菌并将质粒DNA整合到染色体上，这种细菌称为Hfr （染色体上整合有F质粒的细菌） 。
F+菌和Hfr 菌的共同特点是：两者都有性菌毛，均可通过接合方式进行基因转移。
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