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糖型菌落；在液体培养基中混浊生长，液体表面可形成白色菌膜或有沉淀生长
生化反应：脲酶：＋；鸟氨酸：＋；V-P试验： 22~25℃＋； 35~37 ℃－；动力：22~25℃＋； 35~37 ℃－；KIA：KA －－；嗜冷性：在 4℃增菌3周可分离纯化。（主要鉴定特征） 所致疾病：经污染的食物、水通过肠道感染，引起小肠和结肠炎。患者可出现发热、黏液便或水样便，易与菌痢相混淆；腹痛多在回盲部，需与阑尾炎相鉴别。还可由交叉抗原引起结节性红斑、关节炎等自身免疫性疾病。
17、实验室采用传统的试验方法对肠杆菌科细菌进行鉴定，请论述其总体鉴定方法和思路。
将目的菌进行革兰染色，若为革兰阴性杆菌，再作氧化酶和葡萄糖氧化发酵（O/F）试验，如氧化酶阴性、葡萄糖为发酵型则可认为是肠杆菌科细菌。进而根据葡萄糖酸盐和苯丙氨酸拖氨酶试验将肠杆菌科细菌分为三大类，再根据细菌在选择培养基上的颜色和形态、克氏双糖铁培养基上的反应、MIU、IMViC试验结果，综合分析鉴定到种。在肠杆菌科细菌中，EPEC、志贺菌、沙门菌除生化反应鉴定符合外，还需进行血清学试验将其鉴定到群、型。
18、综合分析题
（一）患者刘某，女，40岁，尿频、尿急、尿痛1周，体检：体温38.5℃，明显肾区叩痛，双下肢无水肿。实验室检查：尿WBC 3(+)/HP，偶见白细胞管型。中段尿培养为大肠埃希菌＞10万cfu/mL，纸片扩散法药敏试验结果为头孢噻肟6mm，头孢噻肟/克拉维酸26mm，头孢他啶21mm，头孢他啶/克拉维酸27mm，呋喃妥因25mm(中介判定值为15～16mm)。
(1) 根据以上病情，该患者最可能诊断是什么? 依据有哪些？
(2) 根据题目中所给出的药敏实验结果，可判断此株菌存在哪种耐药机制，由于这种耐药机
制的存在，临床抗生素应用方面应注意哪些问题?
(1) 根据患者有尿频、尿急、尿痛，体温升高的尿路感染典型症状，及尿中白细胞＞5/HP，偶见白细胞管型，尤其是中段尿培养为大肠埃希菌的检验结果，明确了尿路感染的诊断，明显肾区叩痛可进一步诊断为急性肾盂肾炎。因此，该患者最可能的诊断是大肠杆菌引起的急性肾盂肾炎。
(2) 根据头孢噻肟和头孢他啶加克拉维酸后比不加克拉维酸的抑菌环直径均＞5mm，确定此株菌产生超广谱β-内酰胺酶(ESBL)。临床抗生素应用方应避免使用青霉素类、头孢菌素类和氨曲南，即使这些药物的体外实验显示敏感，临床上也可能治疗无效。但对头霉素、碳青霉稀及β-内酰胺酶抑制复合制剂可能敏感。
（二）患者张某，男，16岁，因某日餐后6小时出现发热，发热高烧达39.5℃，伴头痛、恶心、腹痛及腹泻，粪便开始呈稀泥糊状，然后呈粘液脓血便，量不多，每日排便十次至数十次不等，伴里急后重。患者入院后，临床医生初步诊断为急性菌痢，临床采集了患者粪便标本，并送检验科微生物检验室要求做细菌培养，请问你将如何进行检验？并写出你的鉴定步骤与依据。在检验过程中应注意哪些事项？
⑴ 步骤：标本---粪便或肛拭子—（增菌培养）分离培养—初步鉴定—最终鉴定—报告结果。⑵ 增菌培养：若标本含量较少，取新鲜粪便标本脓血粘液部分或肛拭子接种于GN增菌液 增菌后再进行分离培养。
⑶ 分离培养：取新鲜粪便标本脓血粘液部分或增菌培养物同时接种于肠道强、弱选择培养基如SS、MAC平板，以不发酵乳糖型菌落为可疑菌落。
⑷ 初步鉴定：取可疑菌落做KIA、MIU、U等试验。如结果为：KIA：K A － －；MIU：
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－ －/＋ －；IMViC：－/＋ ＋ － －；U —。初步疑为志贺菌。同时转种小斜面做纯培养，为血清学鉴定做准备。
⑸ 最终鉴定：符合志贺菌生化反应特征可进行血清学鉴定。 血清学鉴定（玻片凝集试验）：先用志贺氏4种多价诊断血清作玻片凝集试验，若凝集再用A、B、C、D群单价诊断血清鉴定到种、型。
若出现生化反应符合，血清学不凝集现象，应考虑K抗原的阻断作用，可将菌液加热100℃15～30min后，重复凝集试验。
（三） 4岁男孩在随母亲旅游中，进食小店卖的水果沙拉，回家2天后，出现严重腹部疼痛，腹泻次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，到医院急诊，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合征。 思考题：
⑴ 最可能的病原菌是什么?
⑵ 针对该病例应做哪些微生物学检查?
提示1：4岁患儿有进食水果沙拉史，2天后出现严重腹痛，大便次数不断增加，且多次便血，伴发热、呕吐，检查有溶血性贫血及血小板减少等溶血性尿毒综合征。以上症状提示最可能的病原菌是大肠埃希菌O157:H7。
提示2：针对该可疑病例应及时对肠道内大肠埃希菌感染进行常规微生物学检查，并快速进行毒力和血清型等特征鉴定，以确定防治措施。
弧菌属
1、名词解释：神奈川现象；霍乱红试验。 ⑴ 神奈川现象（kanagawa phenomenon）：将副溶血性弧菌接种于含高盐（7%）的人O型血或兔血及以D-甘露醇做为碳源的我妻（Wagatsuma）琼脂平板上，可产生β溶血，称为神奈川现象，即神奈川试验阳性，是测定该菌是否有致病性的一个重要试验。（即：致病性副溶血性弧菌能溶解人或兔红细胞）。
⑵ 霍乱红试验：出现蔷薇色，为霍乱红试验阳性。霍乱弧菌含有色氨酸酶，能分解色氨酸产生吲哚，霍乱弧菌液能还原硝酸盐为亚硝酸盐，因此当霍乱弧菌培养在含有硝酸盐成分的蛋白胨水中，所产生的亚硝酸盐可与吲哚结合成亚硝酸吲哚，滴加浓硫酸即可出现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性（由于霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性）。
2、霍乱由何菌所致（霍乱弧菌的哪些血清群可引起霍乱）？试述其致病物质及其致病机制。如何进行微生物学检查？
霍乱弧菌O1群与O139群可引起霍乱。
致病物质：霍乱肠毒素；鞭毛；菌毛；黏液素酶等。
致病机制：霍乱弧菌主要是产生霍乱肠毒素，作用于小肠黏膜上皮细胞，使ATP转变为cAMP，使cAMP水平升高，上皮细胞分泌功能增加，肠腔内水钠储留而导致上吐下泻（呕吐与腹泻，米泔水样大便，内含黏液、上皮细胞和弧菌，无炎症细胞）。
微生物学检查：
标本采集：发病早期采集标本
以―米泔水‖样便为主，及时送检。最好就地接种碱性胨水增菌。 卡－布培养基保存
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严密包装，专人送检
肛拭子、水样、细菌战剂如蛤蜊
检验方法－－显微镜检查：
涂片染色：标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列 动力观察：压滴法或暗视野镜检，注意运动方式 制动试验：O1诊断血清与菌体结合，动力消失
分离培养：
将标本直接接种碱性胨水， 35℃ 6～8 h后，接种至TCBS平板或庆大霉素琼脂平板，35℃ 12h～18h出现可疑菌落：应使用Ｏl群和Ｏ139群多价和单价抗血清进行凝集，结合菌落特征和菌体形态，作出初步报告。
TCBS：出现黄色菌落
庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落
生化反应：
粘丝试验：将0.5％去氧胆酸钠水溶液与霍乱弧菌混匀成浓悬液。lmin内悬液由混变清，并变得粘稠。以接种环挑取时有粘丝形成，弧菌属中除副溶血性弧菌的部分菌株外均有此反应。
氧化酶试验（+） 霍乱红试验：霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。当将霍乱弧菌培养于含硝酸盐的蛋白胨水中时，分解培养基色氨酸产生吲哚。同时，还原硝酸盐成为亚硝酸盐，两种产物结合成亚硝酸吲哚。滴加浓硫酸后呈现蔷薇色，是为霍乱红试验阳性。
0／129敏感试验：P82参照标准药敏试验的方法进行。将O／129(2，4二氨基-6，7-二异丙基喋啶)药敏纸片lOμg及150μg的纸片贴在接种有待测菌的琼脂平板，35℃18～24h孵育后，纸片周围任何大小的抑菌环均表现为敏感。
耐盐培养试验：霍乱弧菌能在不含氯化钠和含6％氯化钠培养基中生长。氯化钠浓度高于6％则不生长。
确定血清群：O1群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以确定是否为O1群 确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清型别 确定生物型： 第Ⅳ组噬菌体裂解试验 多粘菌素B敏感试验 鸡红细胞凝集试验 溶血试验 结果分析与报告：
霍乱属于法定的甲类传染病，一旦从病人粪便标本中分离出霍乱弧菌，需立即向上级管理部门报告。
3、对可疑霍乱患者应如何进行快速微生物学检查？
运动试验与制动试验（+）。
动力观察：采取病人―米泔水样‖大便或呕吐物制成悬滴片，观察细菌动力，可见流星或穿梭状动力的细菌。
制动试验： 标本， 霍乱多价诊断血清（效价1：64），用暗视野镜观察，3分钟内运动被抑制的即为阳性。
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4、试述霍乱的防治原则。
⑴ 必须贯彻预防为主的方针，作好国境检疫与交通检疫，防止本病从国外传入；
⑵ 作好―三管‖ （水源、饮食物、粪便的卫生管理）工作，改善社区环境，以切断传播途径； ⑶ 疫苗预防接种，以提高人群免疫力；
⑷ 对霍乱病人应严格隔离治疗，必要时实行疫区封锁，以免疾病向外蔓延；
⑸ 对症治疗，抗菌治疗：①及时补充液体和电解质，预防大量失水导致的低血容量性休克和酸中毒是治疗霍乱的关键；②抗生素的应用：可减少外毒素的产生，加速细菌的清除。
5、临床上常用TCBS培养基分离哪些细菌？其菌落特征如何？
TCBS培养基（硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板）常用于选择分离弧菌属细菌，霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落，因发酵蔗糖产酸而使菌落呈黄色；而副溶血性弧菌形成不发酵蔗糖的绿色菌落。
6、副溶血性弧菌的主要生物学特性与所致的疾病。 主要生物学特性：
⑴ 革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，无荚膜。
⑵ 营养要求不高，嗜盐性，最适盐浓度3.5％NaCl，无盐培养基不生长。 ⑶ TCBS：形成不发酵蔗糖的绿色菌落。 ⑷ 神奈川现象＋。
⑸ 抵抗力弱，不耐热，90℃1 min即被杀死。在水中生存不超过2天：耐碱怕酸，在50％食醋中1min死亡。
所致疾病：食物中毒，该菌经烹饪不当的海产品或盐腌制品所传播，也可因食物容器或砧板生熟不分污染本菌引起。潜伏期5~72小时，可从自限性腹泻至中度霍乱样病症，免疫力不强。
副溶血性弧菌鉴定
氧化酶阳性，O／129(150μg)敏感，发酵葡萄糖、麦芽糖、甘露醇产酸,不发酵蔗糖、乳糖。吲哚试验阳性，脲酶阴性，V-P阴性。 NaCI生长试验：该菌在不含NaCl和含10％NaCl的蛋白胨水中不生长，在含3%和7% NaCl蛋白胨水中生长。
赖氨酸脱羧酶、乌氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性。 神奈川现象阳性。
毒素测定：可用免疫学方法测定TDH和TRH。也可用基因探针和PCR方法直接测定毒素基因tdh或trh。
7、临床病例分析题
某患者因腹泻1天前来就诊。临床检查无腹痛，亦无里急后重感，体表凉；每天腹泻十几次，粪便外观呈稀水样，量多，逐渐呈灰白色水样便，伴呕吐；患者神志淡漠并感口渴。 (1) 此时需做何必要检查?
(2) 若TCBS平板上出现较大黄色菌落，如何进一步鉴定?
(1) 粪便标本直接涂片镜检、动力和制动试验：革兰染色阴性弧菌，呈穿梭样运动有助于诊断霍乱弧菌；直接荧光抗体染色和抗体凝集试验：应用01群和0139群霍乱弧菌的多价和单价抗血清进行凝集，可快速诊断霍乱弧菌感染；粪便标本碱性蛋白胨水增菌；粪便标本接种选择性平板，如TCBS、庆大霉素平板分离培养；霍乱毒素的测定。
(2) 氧化酶试验：霍乱弧菌应为阳性；血清凝集试验：挑选可疑菌落进行01群和0139群霍
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乱弧菌的多价和单价抗血清作凝集反应；生化鉴别试验：如霍乱红试验、粘丝试验、0/129敏感试验，其中包括古典生物型和EI-Tor生物型的鉴别试验等，如多粘菌素B敏感试验。
8、综合题
女，21岁，在欠发达地区工作，突发剧烈腹泻，不久开始呕吐，每日腹泻10多次，大便呈米泔水样。机体一般情况迅速恶化。急送医院，检查：病人脱水，血压为70/50mmHg（正常时为：120/80mmHg），脉搏快但弱。医师诊断为霍乱，并立即给予抗菌补液治疗。病情得以逐步好转。 问题：
⑴ 如何取样快速诊断证明病人为霍乱弧菌感染？
⑵ 如何进行病原菌的分离培养进一步证明是霍乱弧菌感染？ ⑶ 霍乱弧菌引起腹泻的毒力物质是什么？简述其结构。 ⑷ 该毒力物质引起腹泻脱水的关键机制是什么？
⑴ 采取病人“米泔水样”大便或呕吐物制成悬滴或压滴片，观察细菌动力，可见流星或穿
梭状运动的细菌。｛如条件许可，可进一步作制动试验（即标本+霍乱多价诊断血清，用暗视野镜观察，3分钟内运动被抑制），阳性者可诊断。｝ ⑵ ① 标本采集：米泔水‖样便。
② 分离培养与鉴定：将标本直接接种碱性胨水， 35℃ 6～8 h后，接种至TCBS平板
（出现黄色菌落）或庆大霉素琼脂平板（出现中心灰褐色的菌落），35℃ 12h～18h出现可疑菌落，结合菌落特征和菌体形态与生化反应（粘丝试验、霍乱红反应等），最后使用Ｏl群和Ｏ139群多价和单价抗血清进行凝集，确定血清型，作出报告。
9、病历串型最佳选择题
某患者进食后发生恶心、呕吐、腹泻。 ⑴ 不应考虑的细菌是
A.福氏志贺菌 B.伤寒沙门菌 C.大肠埃希菌 D.金黄色葡萄球菌 E.链球菌 ⑵ 关于该菌生化反应，叙述错误的是
A.在3%、7%氯化钠中生长良好 B.在10%氯化钠中不生长 C.无氯化钠的培养基中生长良好 D.神奈川现象阳性 E.碱性蛋白胨水可做该菌增菌培养
⑶ 如果在患者粪便标本中分离到一种菌，革兰染色阴性；其生化反应结果是：氧化酶(+)，蔗糖(-)，动力(+)，吲哚(+)，脲酶(-)。则该菌可能是
A.福氏志贺菌 B.霍乱弧菌 C.大肠埃希菌0157:H7 D.副溶血弧菌 E.蜡样芽胞杆菌 ⑴ E ⑵ C ⑶ D
A.轮状病毒 B.鼠伤寒沙门菌 C.肠致病型大肠杆菌 D.肠产毒型大肠杆菌 E.肠出血型大肠杆菌 F.霍乱弧菌 G..痢疾志贺菌 H.空肠弯曲菌 下述临床表现，最可能由上述哪种病原体引起：
1. 一幼儿日前在5岁生日时得到一只宠物龟,之后出现低热、寒颤、头痛、恶心、呕吐、腹泻，粪便培养查到革兰阴性杆菌，该菌有动力，不发酵乳糖，硫化氢试验阳性。
2. 27岁女患者，新近从墨西哥返回，恶心、腹部绞痛、低热、大量水样泻。粪便标本查到可发酵乳糖的革兰阴性杆菌，此菌在伊红-美蓝琼脂上呈绿色。
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